E,8,悬浮微生物的检测E 8 1、悬浮微生物的采样装置有以下两类。1。采用无源采样装置.如培养皿，2。采用有源采样装置.如撞击采样器，离心采样器 过滤采样器。E，8。2 空气洁净环境中悬浮微生物的静态或空态检测前.应对各类表面进行擦拭消毒，但不得对室内空气进行熏蒸 喷洒之类的消毒 动态检测均不得对表面和空气进行消毒。E。8、3。沉降菌检测应符合下列要求 1。使用直径90mm，Φ90 的培养皿采样,当采用其他直径培养皿时、应使其总面积和Φ90皿总面积相当。2.培养皿中灌注胰蛋白酶大豆琼脂培养基，必须留样作阴性对照，3.培养皿表面应经适当消毒清洁处理后 布置在有代表性的地点和气流扰动极小的地点、在乱流洁净室内培养皿不应布置在送风口正下方，4、当用户没有特定要求时、培养皿应布置在地面及其以上0、8m之内的任意高度 5、每一间洁净室或每一个控制区应设1个阴性对照皿，6，动态监测时也可协商布点位置和高度。7 培养皿数应不少于微粒计数浓度的测点数，如工艺无特殊要求应大于等于表E,8,3中的最少培养皿数,另外各加1个对照皿 8,当延长沉降时间时 可按比例减少最少培养皿数、为防止脱水 最长沉降时间不宜超过1h。当所需沉降时间超过1h、可重叠多皿连续采样、除非经过验证 证明更长的沉降时间可以基本按比例增加菌落数 9.培养皿应从内向外布置。从外向内收皿.10，每布置完1个皿 皿盖只允许斜放在皿边上.对照皿盖挪开即盖上、11 布皿前和收皿后。均应用双层包装保护培养皿,以防污染,12、收皿后皿应倒置摆放。并应及时放入培养箱培养。在培养箱外时间不宜超过2h，如无专业标准规定，对于检测细菌总数，培养温度采用、35、37，培养时间为,24 48,h.对于检测真菌。培养温度，27，29.培养时间3d、13、布皿和收皿的检测人员必须穿无菌服,但不得穿大褂、头、手均不得裸露、裤管应塞在袜套内。并不得穿拖鞋.14。对培养后的皿上菌落计数时 应采用5.10倍放大镜查看、若有2个或更多的菌落重叠,可分辨时则以2个或多个菌落计数，15、当单皿菌落数太大受到质疑时 可按以下原则之一进行处理,1,作为坏点剔除、2、重测，如结果仍大，以两次平均值为准 如结果很小 可再重测 3.重测该处微粒浓度 参考此结果作出判断.所有上述处理方法均应记录在案。16 每皿平均菌落数取到小数点后1位。17，动态监测时每点叠放多个平皿或采用可自动切换的仪器,每点应采满4h以上。每皿可采30min。当只放1个皿时.可少于4h,但不可少于1h，E,8.4,浮游菌采样应符合下列要求、1。使用单级或多级撞击式采样器，离心采样器或过滤采样器。采样必须按所用仪器说明书的步骤进行 特别要注意检测之前对仪器消毒火菌。并对培养皿或培养基条做阴性对照.2,采样点数应不少于微粒计数浓度测点数,3.采样点应在离地0,8m高平面上均匀布置.或经委托方、用户。与检测方协商确定。乱流洁净室内不得在送风口正下方布点、静态或空态检测前对室内各种表面应作擦拭消毒,4、每点采样1次。如工艺无特殊要求 每次采样量应大于等于表E.8，4推荐的浮游菌最小采样量。每次采样时间不宜超过15min、不应超过30min,当洁净度很高、或预期含菌浓度可能很低时 采样量应大于最小采样量很多。以满足减少计数误差的要求。5 采样器应用支架固定.采样时检测人员应退出,手持离心式采样器除外。检测人员的穿戴同本附录E.8、3条第15款。必须手持采样器时，应将手臂伸直、站于下风向,6。采样后宜在2h之内将采样器中的培养皿或培养基条送入培养箱中培养，7，每点平均值取到小数点后1位,8，动态监测的测点位置,数量和高度由工艺并经协商确定 每间洁净室或每一个独立受控环境中各点总采样量。不分级别 均应大于1m3 每点可用多台采样器、9 单点菌落数太大时.应按附录E、8.3条第15款的原则处理.E，8 5、表面染菌密度检测应符合下列要求,1。对于洁净室内围护结构。设备等表面的微生物采样。应采用无菌棉拭子擦抹法 当表面很大。硬且平时 也可采用接触皿法,2。用规格板标定出面积为25cm2的区块,对于围护结构，每面结构不少于4块 对于设备，每件不少于2块，取样地点均协商确定、3 将无菌棉拭于含10mL稀释液试管中浸湿，于管壁上挤干后,对一区块擦抹采样。横竖往返8次 每一区块使用1根无菌棉拭.采样后,以无菌操作方式将棉拭采样端剪入原稀释液试管中，经电动混匀器震荡20s或在手掌振打200次 4。取含菌液体1，0mL 以琼脂灌注法接种平皿,每个样本接种2个平皿，于.35,37，培养箱中培养，24、48.h后计数 5,必须将本次检测所用的稀释液,棉拭子，培养基等留样作阴性比照 6，具体事项遵照卫生部,消毒技术规范、执行。7.对于适用接触皿采样的表面,以无菌操作方式，先将培养基注入硬质或软质Φ55平皿.使培养基表面高出培养皿周边 测试时 将培养皿倒过来。使培养基表面均匀牢固地按压住整个区域5s，不得有环形或线性的运动,8,对于围护结构,每面结构应用不少于4个培养皿按压,对于设备、每件用不少于2个培养皿按压。9,按压取样后的培养皿.应在2h之内。于 35、37.培养箱中培养 24,48.h后计数.10、菌数平均数取到小数点后1位