E,8、悬浮微生物的检测E 8。1,悬浮微生物的采样装置有以下两类 1,采用无源采样装置。如培养皿，2、采用有源采样装置,如撞击采样器、离心采样器、过滤采样器,E，8 2，空气洁净环境中悬浮微生物的静态或空态检测前.应对各类表面进行擦拭消毒,但不得对室内空气进行熏蒸，喷洒之类的消毒、动态检测均不得对表面和空气进行消毒、E、8。3 沉降菌检测应符合下列要求.1,使用直径90mm.Φ90。的培养皿采样，当采用其他直径培养皿时，应使其总面积和Φ90皿总面积相当、2、培养皿中灌注胰蛋白酶大豆琼脂培养基，必须留样作阴性对照、3、培养皿表面应经适当消毒清洁处理后。布置在有代表性的地点和气流扰动极小的地点、在乱流洁净室内培养皿不应布置在送风口正下方 4，当用户没有特定要求时，培养皿应布置在地面及其以上0.8m之内的任意高度、5、每一间洁净室或每一个控制区应设1个阴性对照皿 6、动态监测时也可协商布点位置和高度、7，培养皿数应不少于微粒计数浓度的测点数 如工艺无特殊要求应大于等于表E.8、3中的最少培养皿数,另外各加1个对照皿 8,当延长沉降时间时，可按比例减少最少培养皿数。为防止脱水 最长沉降时间不宜超过1h、当所需沉降时间超过1h，可重叠多皿连续采样.除非经过验证 证明更长的沉降时间可以基本按比例增加菌落数，9 培养皿应从内向外布置,从外向内收皿，10，每布置完1个皿,皿盖只允许斜放在皿边上。对照皿盖挪开即盖上。11、布皿前和收皿后、均应用双层包装保护培养皿、以防污染、12、收皿后皿应倒置摆放 并应及时放入培养箱培养,在培养箱外时间不宜超过2h,如无专业标准规定,对于检测细菌总数。培养温度采用,35、37.培养时间为.24、48、h。对于检测真菌、培养温度、27 29，培养时间3d、13，布皿和收皿的检测人员必须穿无菌服。但不得穿大褂。头，手均不得裸露,裤管应塞在袜套内、并不得穿拖鞋、14，对培养后的皿上菌落计数时.应采用5、10倍放大镜查看.若有2个或更多的菌落重叠,可分辨时则以2个或多个菌落计数。15、当单皿菌落数太大受到质疑时 可按以下原则之一进行处理，1。作为坏点剔除,2，重测。如结果仍大 以两次平均值为准，如结果很小。可再重测、3，重测该处微粒浓度、参考此结果作出判断,所有上述处理方法均应记录在案。16,每皿平均菌落数取到小数点后1位.17。动态监测时每点叠放多个平皿或采用可自动切换的仪器。每点应采满4h以上、每皿可采30min 当只放1个皿时。可少于4h，但不可少于1h，E。8 4，浮游菌采样应符合下列要求。1.使用单级或多级撞击式采样器.离心采样器或过滤采样器，采样必须按所用仪器说明书的步骤进行,特别要注意检测之前对仪器消毒火菌，并对培养皿或培养基条做阴性对照，2,采样点数应不少于微粒计数浓度测点数、3 采样点应在离地0.8m高平面上均匀布置.或经委托方.用户。与检测方协商确定 乱流洁净室内不得在送风口正下方布点 静态或空态检测前对室内各种表面应作擦拭消毒,4，每点采样1次,如工艺无特殊要求。每次采样量应大于等于表E、8，4推荐的浮游菌最小采样量。每次采样时间不宜超过15min 不应超过30min，当洁净度很高，或预期含菌浓度可能很低时，采样量应大于最小采样量很多。以满足减少计数误差的要求，5.采样器应用支架固定 采样时检测人员应退出 手持离心式采样器除外。检测人员的穿戴同本附录E,8 3条第15款。必须手持采样器时 应将手臂伸直、站于下风向、6 采样后宜在2h之内将采样器中的培养皿或培养基条送入培养箱中培养，7,每点平均值取到小数点后1位.8。动态监测的测点位置,数量和高度由工艺并经协商确定、每间洁净室或每一个独立受控环境中各点总采样量.不分级别.均应大于1m3 每点可用多台采样器。9。单点菌落数太大时,应按附录E,8.3条第15款的原则处理.E 8，5.表面染菌密度检测应符合下列要求,1、对于洁净室内围护结构,设备等表面的微生物采样,应采用无菌棉拭子擦抹法.当表面很大,硬且平时 也可采用接触皿法.2。用规格板标定出面积为25cm2的区块.对于围护结构。每面结构不少于4块、对于设备,每件不少于2块。取样地点均协商确定、3。将无菌棉拭于含10mL稀释液试管中浸湿 于管壁上挤干后.对一区块擦抹采样 横竖往返8次 每一区块使用1根无菌棉拭 采样后.以无菌操作方式将棉拭采样端剪入原稀释液试管中、经电动混匀器震荡20s或在手掌振打200次、4，取含菌液体1,0mL，以琼脂灌注法接种平皿 每个样本接种2个平皿、于、35，37,培养箱中培养、24。48、h后计数 5、必须将本次检测所用的稀释液。棉拭子，培养基等留样作阴性比照，6，具体事项遵照卫生部，消毒技术规范.执行,7，对于适用接触皿采样的表面。以无菌操作方式。先将培养基注入硬质或软质Φ55平皿,使培养基表面高出培养皿周边。测试时 将培养皿倒过来.使培养基表面均匀牢固地按压住整个区域5s,不得有环形或线性的运动 8.对于围护结构、每面结构应用不少于4个培养皿按压，对于设备,每件用不少于2个培养皿按压。9、按压取样后的培养皿，应在2h之内、于,35、37.培养箱中培养,24,48 h后计数 10.菌数平均数取到小数点后1位