E.8,悬浮微生物的检测E 8,1 悬浮微生物的采样装置有以下两类。1.采用无源采样装置，如培养皿.2，采用有源采样装置。如撞击采样器。离心采样器、过滤采样器、E，8，2,空气洁净环境中悬浮微生物的静态或空态检测前.应对各类表面进行擦拭消毒,但不得对室内空气进行熏蒸,喷洒之类的消毒、动态检测均不得对表面和空气进行消毒。E,8，3。沉降菌检测应符合下列要求、1。使用直径90mm,Φ90，的培养皿采样 当采用其他直径培养皿时,应使其总面积和Φ90皿总面积相当，2、培养皿中灌注胰蛋白酶大豆琼脂培养基.必须留样作阴性对照，3。培养皿表面应经适当消毒清洁处理后、布置在有代表性的地点和气流扰动极小的地点,在乱流洁净室内培养皿不应布置在送风口正下方.4、当用户没有特定要求时 培养皿应布置在地面及其以上0,8m之内的任意高度 5，每一间洁净室或每一个控制区应设1个阴性对照皿，6。动态监测时也可协商布点位置和高度。7,培养皿数应不少于微粒计数浓度的测点数、如工艺无特殊要求应大于等于表E 8。3中的最少培养皿数,另外各加1个对照皿,8,当延长沉降时间时，可按比例减少最少培养皿数，为防止脱水 最长沉降时间不宜超过1h，当所需沉降时间超过1h 可重叠多皿连续采样。除非经过验证 证明更长的沉降时间可以基本按比例增加菌落数.9 培养皿应从内向外布置.从外向内收皿。10 每布置完1个皿.皿盖只允许斜放在皿边上。对照皿盖挪开即盖上，11,布皿前和收皿后、均应用双层包装保护培养皿 以防污染,12，收皿后皿应倒置摆放,并应及时放入培养箱培养.在培养箱外时间不宜超过2h。如无专业标准规定.对于检测细菌总数 培养温度采用 35，37。培养时间为。24，48、h,对于检测真菌。培养温度.27,29 培养时间3d，13。布皿和收皿的检测人员必须穿无菌服。但不得穿大褂。头、手均不得裸露，裤管应塞在袜套内,并不得穿拖鞋。14,对培养后的皿上菌落计数时，应采用5.10倍放大镜查看,若有2个或更多的菌落重叠.可分辨时则以2个或多个菌落计数、15。当单皿菌落数太大受到质疑时。可按以下原则之一进行处理 1、作为坏点剔除,2、重测,如结果仍大。以两次平均值为准，如结果很小 可再重测 3、重测该处微粒浓度。参考此结果作出判断.所有上述处理方法均应记录在案 16。每皿平均菌落数取到小数点后1位.17,动态监测时每点叠放多个平皿或采用可自动切换的仪器,每点应采满4h以上，每皿可采30min、当只放1个皿时，可少于4h、但不可少于1h E.8、4.浮游菌采样应符合下列要求,1，使用单级或多级撞击式采样器.离心采样器或过滤采样器，采样必须按所用仪器说明书的步骤进行。特别要注意检测之前对仪器消毒火菌.并对培养皿或培养基条做阴性对照.2。采样点数应不少于微粒计数浓度测点数.3。采样点应在离地0.8m高平面上均匀布置.或经委托方，用户 与检测方协商确定,乱流洁净室内不得在送风口正下方布点、静态或空态检测前对室内各种表面应作擦拭消毒。4，每点采样1次,如工艺无特殊要求,每次采样量应大于等于表E.8，4推荐的浮游菌最小采样量 每次采样时间不宜超过15min、不应超过30min，当洁净度很高 或预期含菌浓度可能很低时。采样量应大于最小采样量很多 以满足减少计数误差的要求、5，采样器应用支架固定,采样时检测人员应退出,手持离心式采样器除外。检测人员的穿戴同本附录E。8,3条第15款 必须手持采样器时 应将手臂伸直.站于下风向.6,采样后宜在2h之内将采样器中的培养皿或培养基条送入培养箱中培养、7，每点平均值取到小数点后1位，8 动态监测的测点位置,数量和高度由工艺并经协商确定.每间洁净室或每一个独立受控环境中各点总采样量、不分级别.均应大于1m3.每点可用多台采样器、9.单点菌落数太大时，应按附录E.8.3条第15款的原则处理 E.8.5、表面染菌密度检测应符合下列要求 1，对于洁净室内围护结构，设备等表面的微生物采样.应采用无菌棉拭子擦抹法，当表面很大,硬且平时,也可采用接触皿法，2。用规格板标定出面积为25cm2的区块,对于围护结构、每面结构不少于4块。对于设备、每件不少于2块.取样地点均协商确定 3,将无菌棉拭于含10mL稀释液试管中浸湿，于管壁上挤干后。对一区块擦抹采样,横竖往返8次 每一区块使用1根无菌棉拭、采样后 以无菌操作方式将棉拭采样端剪入原稀释液试管中,经电动混匀器震荡20s或在手掌振打200次、4。取含菌液体1 0mL 以琼脂灌注法接种平皿.每个样本接种2个平皿.于、35。37，培养箱中培养。24。48、h后计数,5、必须将本次检测所用的稀释液,棉拭子 培养基等留样作阴性比照。6 具体事项遵照卫生部.消毒技术规范，执行、7、对于适用接触皿采样的表面，以无菌操作方式,先将培养基注入硬质或软质Φ55平皿 使培养基表面高出培养皿周边.测试时，将培养皿倒过来,使培养基表面均匀牢固地按压住整个区域5s、不得有环形或线性的运动.8.对于围护结构 每面结构应用不少于4个培养皿按压,对于设备。每件用不少于2个培养皿按压.9。按压取样后的培养皿.应在2h之内。于，35 37，培养箱中培养、24。48 h后计数，10 菌数平均数取到小数点后1位、