E、8。悬浮微生物的检测E.8。1，悬浮微生物的采样装置有以下两类。1.采用无源采样装置.如培养皿、2.采用有源采样装置、如撞击采样器，离心采样器，过滤采样器,E。8。2 空气洁净环境中悬浮微生物的静态或空态检测前、应对各类表面进行擦拭消毒，但不得对室内空气进行熏蒸，喷洒之类的消毒，动态检测均不得对表面和空气进行消毒.E、8 3。沉降菌检测应符合下列要求。1。使用直径90mm.Φ90,的培养皿采样 当采用其他直径培养皿时.应使其总面积和Φ90皿总面积相当。2 培养皿中灌注胰蛋白酶大豆琼脂培养基 必须留样作阴性对照、3,培养皿表面应经适当消毒清洁处理后，布置在有代表性的地点和气流扰动极小的地点，在乱流洁净室内培养皿不应布置在送风口正下方.4、当用户没有特定要求时.培养皿应布置在地面及其以上0,8m之内的任意高度,5 每一间洁净室或每一个控制区应设1个阴性对照皿。6 动态监测时也可协商布点位置和高度,7，培养皿数应不少于微粒计数浓度的测点数 如工艺无特殊要求应大于等于表E、8 3中的最少培养皿数，另外各加1个对照皿.8。当延长沉降时间时,可按比例减少最少培养皿数,为防止脱水，最长沉降时间不宜超过1h、当所需沉降时间超过1h 可重叠多皿连续采样,除非经过验证,证明更长的沉降时间可以基本按比例增加菌落数 9.培养皿应从内向外布置 从外向内收皿,10.每布置完1个皿.皿盖只允许斜放在皿边上.对照皿盖挪开即盖上。11,布皿前和收皿后、均应用双层包装保护培养皿，以防污染,12.收皿后皿应倒置摆放、并应及时放入培养箱培养，在培养箱外时间不宜超过2h，如无专业标准规定 对于检测细菌总数.培养温度采用。35。37 培养时间为.24。48,h,对于检测真菌.培养温度.27、29.培养时间3d.13、布皿和收皿的检测人员必须穿无菌服，但不得穿大褂.头、手均不得裸露.裤管应塞在袜套内，并不得穿拖鞋。14 对培养后的皿上菌落计数时、应采用5，10倍放大镜查看，若有2个或更多的菌落重叠,可分辨时则以2个或多个菌落计数、15 当单皿菌落数太大受到质疑时，可按以下原则之一进行处理。1,作为坏点剔除，2、重测、如结果仍大.以两次平均值为准,如结果很小、可再重测 3。重测该处微粒浓度，参考此结果作出判断。所有上述处理方法均应记录在案、16 每皿平均菌落数取到小数点后1位 17 动态监测时每点叠放多个平皿或采用可自动切换的仪器 每点应采满4h以上、每皿可采30min.当只放1个皿时,可少于4h 但不可少于1h.E 8,4,浮游菌采样应符合下列要求。1 使用单级或多级撞击式采样器、离心采样器或过滤采样器、采样必须按所用仪器说明书的步骤进行、特别要注意检测之前对仪器消毒火菌、并对培养皿或培养基条做阴性对照、2，采样点数应不少于微粒计数浓度测点数.3、采样点应在离地0.8m高平面上均匀布置。或经委托方,用户 与检测方协商确定,乱流洁净室内不得在送风口正下方布点.静态或空态检测前对室内各种表面应作擦拭消毒、4、每点采样1次.如工艺无特殊要求。每次采样量应大于等于表E,8，4推荐的浮游菌最小采样量 每次采样时间不宜超过15min 不应超过30min.当洁净度很高.或预期含菌浓度可能很低时。采样量应大于最小采样量很多。以满足减少计数误差的要求 5，采样器应用支架固定、采样时检测人员应退出。手持离心式采样器除外。检测人员的穿戴同本附录E.8，3条第15款.必须手持采样器时。应将手臂伸直 站于下风向,6，采样后宜在2h之内将采样器中的培养皿或培养基条送入培养箱中培养.7 每点平均值取到小数点后1位。8。动态监测的测点位置。数量和高度由工艺并经协商确定、每间洁净室或每一个独立受控环境中各点总采样量 不分级别 均应大于1m3，每点可用多台采样器，9。单点菌落数太大时 应按附录E。8 3条第15款的原则处理,E、8,5 表面染菌密度检测应符合下列要求。1。对于洁净室内围护结构.设备等表面的微生物采样，应采用无菌棉拭子擦抹法.当表面很大。硬且平时,也可采用接触皿法，2 用规格板标定出面积为25cm2的区块，对于围护结构，每面结构不少于4块，对于设备，每件不少于2块、取样地点均协商确定.3。将无菌棉拭于含10mL稀释液试管中浸湿、于管壁上挤干后,对一区块擦抹采样。横竖往返8次、每一区块使用1根无菌棉拭.采样后、以无菌操作方式将棉拭采样端剪入原稀释液试管中.经电动混匀器震荡20s或在手掌振打200次，4 取含菌液体1，0mL。以琼脂灌注法接种平皿 每个样本接种2个平皿 于，35.37.培养箱中培养，24，48、h后计数 5、必须将本次检测所用的稀释液,棉拭子，培养基等留样作阴性比照,6,具体事项遵照卫生部 消毒技术规范、执行.7，对于适用接触皿采样的表面,以无菌操作方式,先将培养基注入硬质或软质Φ55平皿，使培养基表面高出培养皿周边。测试时,将培养皿倒过来。使培养基表面均匀牢固地按压住整个区域5s 不得有环形或线性的运动.8，对于围护结构。每面结构应用不少于4个培养皿按压，对于设备.每件用不少于2个培养皿按压。9.按压取样后的培养皿,应在2h之内 于。35，37，培养箱中培养、24、48 h后计数 10,菌数平均数取到小数点后1位.