E,8 悬浮微生物的检测E,8。1。悬浮微生物的采样装置有以下两类 1。采用无源采样装置 如培养皿 2,采用有源采样装置、如撞击采样器 离心采样器，过滤采样器,E.8 2。空气洁净环境中悬浮微生物的静态或空态检测前,应对各类表面进行擦拭消毒、但不得对室内空气进行熏蒸。喷洒之类的消毒 动态检测均不得对表面和空气进行消毒.E,8。3、沉降菌检测应符合下列要求，1,使用直径90mm。Φ90。的培养皿采样，当采用其他直径培养皿时。应使其总面积和Φ90皿总面积相当，2 培养皿中灌注胰蛋白酶大豆琼脂培养基。必须留样作阴性对照.3。培养皿表面应经适当消毒清洁处理后、布置在有代表性的地点和气流扰动极小的地点。在乱流洁净室内培养皿不应布置在送风口正下方,4,当用户没有特定要求时、培养皿应布置在地面及其以上0，8m之内的任意高度.5,每一间洁净室或每一个控制区应设1个阴性对照皿.6。动态监测时也可协商布点位置和高度 7、培养皿数应不少于微粒计数浓度的测点数 如工艺无特殊要求应大于等于表E 8，3中的最少培养皿数。另外各加1个对照皿，8.当延长沉降时间时、可按比例减少最少培养皿数.为防止脱水 最长沉降时间不宜超过1h 当所需沉降时间超过1h，可重叠多皿连续采样 除非经过验证 证明更长的沉降时间可以基本按比例增加菌落数 9、培养皿应从内向外布置，从外向内收皿、10。每布置完1个皿,皿盖只允许斜放在皿边上。对照皿盖挪开即盖上.11。布皿前和收皿后,均应用双层包装保护培养皿 以防污染 12.收皿后皿应倒置摆放.并应及时放入培养箱培养，在培养箱外时间不宜超过2h 如无专业标准规定,对于检测细菌总数.培养温度采用.35，37。培养时间为，24。48,h 对于检测真菌,培养温度。27.29 培养时间3d，13 布皿和收皿的检测人员必须穿无菌服 但不得穿大褂。头,手均不得裸露、裤管应塞在袜套内、并不得穿拖鞋,14。对培养后的皿上菌落计数时，应采用5。10倍放大镜查看、若有2个或更多的菌落重叠,可分辨时则以2个或多个菌落计数.15 当单皿菌落数太大受到质疑时，可按以下原则之一进行处理，1、作为坏点剔除,2。重测.如结果仍大 以两次平均值为准。如结果很小、可再重测，3、重测该处微粒浓度.参考此结果作出判断.所有上述处理方法均应记录在案，16、每皿平均菌落数取到小数点后1位。17、动态监测时每点叠放多个平皿或采用可自动切换的仪器.每点应采满4h以上.每皿可采30min 当只放1个皿时。可少于4h,但不可少于1h.E.8、4、浮游菌采样应符合下列要求 1、使用单级或多级撞击式采样器。离心采样器或过滤采样器，采样必须按所用仪器说明书的步骤进行、特别要注意检测之前对仪器消毒火菌,并对培养皿或培养基条做阴性对照 2，采样点数应不少于微粒计数浓度测点数、3.采样点应在离地0。8m高平面上均匀布置。或经委托方。用户。与检测方协商确定，乱流洁净室内不得在送风口正下方布点.静态或空态检测前对室内各种表面应作擦拭消毒,4 每点采样1次，如工艺无特殊要求。每次采样量应大于等于表E。8、4推荐的浮游菌最小采样量，每次采样时间不宜超过15min,不应超过30min，当洁净度很高,或预期含菌浓度可能很低时.采样量应大于最小采样量很多.以满足减少计数误差的要求.5。采样器应用支架固定、采样时检测人员应退出。手持离心式采样器除外。检测人员的穿戴同本附录E.8、3条第15款,必须手持采样器时,应将手臂伸直，站于下风向.6.采样后宜在2h之内将采样器中的培养皿或培养基条送入培养箱中培养.7。每点平均值取到小数点后1位、8。动态监测的测点位置,数量和高度由工艺并经协商确定.每间洁净室或每一个独立受控环境中各点总采样量，不分级别。均应大于1m3，每点可用多台采样器.9 单点菌落数太大时、应按附录E,8.3条第15款的原则处理.E。8。5,表面染菌密度检测应符合下列要求 1.对于洁净室内围护结构.设备等表面的微生物采样。应采用无菌棉拭子擦抹法、当表面很大，硬且平时、也可采用接触皿法 2 用规格板标定出面积为25cm2的区块.对于围护结构.每面结构不少于4块，对于设备.每件不少于2块、取样地点均协商确定。3 将无菌棉拭于含10mL稀释液试管中浸湿.于管壁上挤干后,对一区块擦抹采样 横竖往返8次。每一区块使用1根无菌棉拭,采样后 以无菌操作方式将棉拭采样端剪入原稀释液试管中、经电动混匀器震荡20s或在手掌振打200次。4。取含菌液体1 0mL。以琼脂灌注法接种平皿,每个样本接种2个平皿,于、35,37.培养箱中培养 24 48，h后计数,5 必须将本次检测所用的稀释液，棉拭子，培养基等留样作阴性比照。6，具体事项遵照卫生部,消毒技术规范.执行、7、对于适用接触皿采样的表面,以无菌操作方式,先将培养基注入硬质或软质Φ55平皿。使培养基表面高出培养皿周边，测试时。将培养皿倒过来 使培养基表面均匀牢固地按压住整个区域5s.不得有环形或线性的运动。8 对于围护结构,每面结构应用不少于4个培养皿按压 对于设备、每件用不少于2个培养皿按压，9 按压取样后的培养皿、应在2h之内,于、35 37。培养箱中培养.24,48，h后计数.10。菌数平均数取到小数点后1位。