E.8、悬浮微生物的检测E。8,1,悬浮微生物的采样装置有以下两类,1，采用无源采样装置 如培养皿,2。采用有源采样装置.如撞击采样器、离心采样器、过滤采样器,E,8,2.空气洁净环境中悬浮微生物的静态或空态检测前、应对各类表面进行擦拭消毒 但不得对室内空气进行熏蒸。喷洒之类的消毒、动态检测均不得对表面和空气进行消毒。E.8，3，沉降菌检测应符合下列要求。1，使用直径90mm，Φ90，的培养皿采样 当采用其他直径培养皿时。应使其总面积和Φ90皿总面积相当 2、培养皿中灌注胰蛋白酶大豆琼脂培养基 必须留样作阴性对照。3,培养皿表面应经适当消毒清洁处理后，布置在有代表性的地点和气流扰动极小的地点、在乱流洁净室内培养皿不应布置在送风口正下方，4，当用户没有特定要求时、培养皿应布置在地面及其以上0.8m之内的任意高度、5。每一间洁净室或每一个控制区应设1个阴性对照皿，6.动态监测时也可协商布点位置和高度、7。培养皿数应不少于微粒计数浓度的测点数、如工艺无特殊要求应大于等于表E.8 3中的最少培养皿数,另外各加1个对照皿 8、当延长沉降时间时.可按比例减少最少培养皿数。为防止脱水。最长沉降时间不宜超过1h 当所需沉降时间超过1h、可重叠多皿连续采样 除非经过验证、证明更长的沉降时间可以基本按比例增加菌落数 9，培养皿应从内向外布置。从外向内收皿,10、每布置完1个皿 皿盖只允许斜放在皿边上、对照皿盖挪开即盖上 11,布皿前和收皿后、均应用双层包装保护培养皿、以防污染。12.收皿后皿应倒置摆放.并应及时放入培养箱培养。在培养箱外时间不宜超过2h.如无专业标准规定。对于检测细菌总数,培养温度采用、35.37,培养时间为、24 48,h,对于检测真菌 培养温度 27。29 培养时间3d、13，布皿和收皿的检测人员必须穿无菌服 但不得穿大褂.头、手均不得裸露、裤管应塞在袜套内,并不得穿拖鞋，14。对培养后的皿上菌落计数时.应采用5.10倍放大镜查看 若有2个或更多的菌落重叠，可分辨时则以2个或多个菌落计数、15、当单皿菌落数太大受到质疑时,可按以下原则之一进行处理、1，作为坏点剔除,2，重测、如结果仍大 以两次平均值为准 如结果很小,可再重测。3.重测该处微粒浓度。参考此结果作出判断.所有上述处理方法均应记录在案。16 每皿平均菌落数取到小数点后1位 17,动态监测时每点叠放多个平皿或采用可自动切换的仪器.每点应采满4h以上 每皿可采30min。当只放1个皿时，可少于4h 但不可少于1h.E、8 4,浮游菌采样应符合下列要求,1,使用单级或多级撞击式采样器，离心采样器或过滤采样器。采样必须按所用仪器说明书的步骤进行.特别要注意检测之前对仪器消毒火菌、并对培养皿或培养基条做阴性对照 2,采样点数应不少于微粒计数浓度测点数 3。采样点应在离地0.8m高平面上均匀布置 或经委托方 用户。与检测方协商确定、乱流洁净室内不得在送风口正下方布点.静态或空态检测前对室内各种表面应作擦拭消毒 4。每点采样1次。如工艺无特殊要求，每次采样量应大于等于表E.8。4推荐的浮游菌最小采样量。每次采样时间不宜超过15min、不应超过30min.当洁净度很高，或预期含菌浓度可能很低时.采样量应大于最小采样量很多.以满足减少计数误差的要求，5。采样器应用支架固定,采样时检测人员应退出.手持离心式采样器除外,检测人员的穿戴同本附录E，8、3条第15款 必须手持采样器时，应将手臂伸直、站于下风向、6 采样后宜在2h之内将采样器中的培养皿或培养基条送入培养箱中培养，7.每点平均值取到小数点后1位。8.动态监测的测点位置。数量和高度由工艺并经协商确定,每间洁净室或每一个独立受控环境中各点总采样量、不分级别、均应大于1m3，每点可用多台采样器、9 单点菌落数太大时。应按附录E.8.3条第15款的原则处理.E、8、5、表面染菌密度检测应符合下列要求.1,对于洁净室内围护结构,设备等表面的微生物采样，应采用无菌棉拭子擦抹法.当表面很大、硬且平时。也可采用接触皿法 2、用规格板标定出面积为25cm2的区块，对于围护结构，每面结构不少于4块 对于设备。每件不少于2块,取样地点均协商确定.3。将无菌棉拭于含10mL稀释液试管中浸湿 于管壁上挤干后 对一区块擦抹采样,横竖往返8次、每一区块使用1根无菌棉拭，采样后，以无菌操作方式将棉拭采样端剪入原稀释液试管中、经电动混匀器震荡20s或在手掌振打200次 4,取含菌液体1.0mL。以琼脂灌注法接种平皿、每个样本接种2个平皿,于.35、37 培养箱中培养,24.48。h后计数.5、必须将本次检测所用的稀释液,棉拭子 培养基等留样作阴性比照，6，具体事项遵照卫生部，消毒技术规范。执行。7。对于适用接触皿采样的表面，以无菌操作方式.先将培养基注入硬质或软质Φ55平皿、使培养基表面高出培养皿周边、测试时。将培养皿倒过来.使培养基表面均匀牢固地按压住整个区域5s.不得有环形或线性的运动.8,对于围护结构。每面结构应用不少于4个培养皿按压。对于设备，每件用不少于2个培养皿按压。9。按压取样后的培养皿 应在2h之内.于，35 37。培养箱中培养、24，48 h后计数.10 菌数平均数取到小数点后1位