E,8、悬浮微生物的检测E,8，1，悬浮微生物的采样装置有以下两类。1，采用无源采样装置.如培养皿，2、采用有源采样装置，如撞击采样器、离心采样器。过滤采样器、E 8。2，空气洁净环境中悬浮微生物的静态或空态检测前，应对各类表面进行擦拭消毒，但不得对室内空气进行熏蒸,喷洒之类的消毒 动态检测均不得对表面和空气进行消毒.E，8,3。沉降菌检测应符合下列要求、1。使用直径90mm Φ90 的培养皿采样，当采用其他直径培养皿时 应使其总面积和Φ90皿总面积相当 2、培养皿中灌注胰蛋白酶大豆琼脂培养基,必须留样作阴性对照，3、培养皿表面应经适当消毒清洁处理后，布置在有代表性的地点和气流扰动极小的地点.在乱流洁净室内培养皿不应布置在送风口正下方 4.当用户没有特定要求时、培养皿应布置在地面及其以上0。8m之内的任意高度,5 每一间洁净室或每一个控制区应设1个阴性对照皿 6，动态监测时也可协商布点位置和高度,7 培养皿数应不少于微粒计数浓度的测点数、如工艺无特殊要求应大于等于表E、8 3中的最少培养皿数，另外各加1个对照皿，8 当延长沉降时间时，可按比例减少最少培养皿数.为防止脱水，最长沉降时间不宜超过1h 当所需沉降时间超过1h,可重叠多皿连续采样.除非经过验证,证明更长的沉降时间可以基本按比例增加菌落数，9、培养皿应从内向外布置,从外向内收皿 10.每布置完1个皿 皿盖只允许斜放在皿边上,对照皿盖挪开即盖上，11,布皿前和收皿后 均应用双层包装保护培养皿 以防污染，12 收皿后皿应倒置摆放。并应及时放入培养箱培养.在培养箱外时间不宜超过2h，如无专业标准规定，对于检测细菌总数,培养温度采用、35、37，培养时间为,24。48.h，对于检测真菌，培养温度、27、29、培养时间3d。13，布皿和收皿的检测人员必须穿无菌服，但不得穿大褂。头.手均不得裸露。裤管应塞在袜套内.并不得穿拖鞋,14 对培养后的皿上菌落计数时，应采用5.10倍放大镜查看 若有2个或更多的菌落重叠.可分辨时则以2个或多个菌落计数.15 当单皿菌落数太大受到质疑时 可按以下原则之一进行处理 1.作为坏点剔除、2、重测。如结果仍大 以两次平均值为准 如结果很小。可再重测 3.重测该处微粒浓度，参考此结果作出判断.所有上述处理方法均应记录在案，16，每皿平均菌落数取到小数点后1位,17,动态监测时每点叠放多个平皿或采用可自动切换的仪器，每点应采满4h以上.每皿可采30min 当只放1个皿时.可少于4h.但不可少于1h,E，8 4,浮游菌采样应符合下列要求，1，使用单级或多级撞击式采样器、离心采样器或过滤采样器。采样必须按所用仪器说明书的步骤进行、特别要注意检测之前对仪器消毒火菌、并对培养皿或培养基条做阴性对照，2。采样点数应不少于微粒计数浓度测点数、3.采样点应在离地0、8m高平面上均匀布置,或经委托方 用户.与检测方协商确定。乱流洁净室内不得在送风口正下方布点.静态或空态检测前对室内各种表面应作擦拭消毒,4，每点采样1次 如工艺无特殊要求 每次采样量应大于等于表E,8.4推荐的浮游菌最小采样量.每次采样时间不宜超过15min。不应超过30min，当洁净度很高.或预期含菌浓度可能很低时,采样量应大于最小采样量很多、以满足减少计数误差的要求，5，采样器应用支架固定、采样时检测人员应退出。手持离心式采样器除外、检测人员的穿戴同本附录E、8 3条第15款，必须手持采样器时。应将手臂伸直,站于下风向。6 采样后宜在2h之内将采样器中的培养皿或培养基条送入培养箱中培养,7。每点平均值取到小数点后1位、8 动态监测的测点位置，数量和高度由工艺并经协商确定,每间洁净室或每一个独立受控环境中各点总采样量，不分级别 均应大于1m3.每点可用多台采样器,9，单点菌落数太大时、应按附录E，8,3条第15款的原则处理 E、8 5，表面染菌密度检测应符合下列要求 1,对于洁净室内围护结构.设备等表面的微生物采样.应采用无菌棉拭子擦抹法 当表面很大，硬且平时、也可采用接触皿法.2。用规格板标定出面积为25cm2的区块。对于围护结构、每面结构不少于4块 对于设备。每件不少于2块,取样地点均协商确定。3 将无菌棉拭于含10mL稀释液试管中浸湿、于管壁上挤干后 对一区块擦抹采样 横竖往返8次、每一区块使用1根无菌棉拭 采样后，以无菌操作方式将棉拭采样端剪入原稀释液试管中。经电动混匀器震荡20s或在手掌振打200次,4。取含菌液体1，0mL 以琼脂灌注法接种平皿,每个样本接种2个平皿、于、35、37,培养箱中培养.24 48。h后计数,5。必须将本次检测所用的稀释液，棉拭子。培养基等留样作阴性比照，6,具体事项遵照卫生部 消毒技术规范 执行,7。对于适用接触皿采样的表面、以无菌操作方式、先将培养基注入硬质或软质Φ55平皿，使培养基表面高出培养皿周边，测试时，将培养皿倒过来。使培养基表面均匀牢固地按压住整个区域5s,不得有环形或线性的运动 8。对于围护结构.每面结构应用不少于4个培养皿按压.对于设备 每件用不少于2个培养皿按压.9，按压取样后的培养皿.应在2h之内，于、35、37，培养箱中培养.24.48。h后计数，10 菌数平均数取到小数点后1位,