E，8,悬浮微生物的检测E 8，1，悬浮微生物的采样装置有以下两类，1,采用无源采样装置、如培养皿.2，采用有源采样装置、如撞击采样器 离心采样器.过滤采样器 E.8 2.空气洁净环境中悬浮微生物的静态或空态检测前 应对各类表面进行擦拭消毒，但不得对室内空气进行熏蒸.喷洒之类的消毒、动态检测均不得对表面和空气进行消毒,E。8、3。沉降菌检测应符合下列要求.1.使用直径90mm,Φ90,的培养皿采样，当采用其他直径培养皿时，应使其总面积和Φ90皿总面积相当、2，培养皿中灌注胰蛋白酶大豆琼脂培养基，必须留样作阴性对照 3，培养皿表面应经适当消毒清洁处理后。布置在有代表性的地点和气流扰动极小的地点，在乱流洁净室内培养皿不应布置在送风口正下方，4、当用户没有特定要求时，培养皿应布置在地面及其以上0 8m之内的任意高度，5,每一间洁净室或每一个控制区应设1个阴性对照皿、6.动态监测时也可协商布点位置和高度 7、培养皿数应不少于微粒计数浓度的测点数，如工艺无特殊要求应大于等于表E 8、3中的最少培养皿数,另外各加1个对照皿，8，当延长沉降时间时。可按比例减少最少培养皿数，为防止脱水、最长沉降时间不宜超过1h。当所需沉降时间超过1h,可重叠多皿连续采样 除非经过验证 证明更长的沉降时间可以基本按比例增加菌落数 9、培养皿应从内向外布置,从外向内收皿 10 每布置完1个皿，皿盖只允许斜放在皿边上。对照皿盖挪开即盖上,11。布皿前和收皿后.均应用双层包装保护培养皿,以防污染，12.收皿后皿应倒置摆放。并应及时放入培养箱培养、在培养箱外时间不宜超过2h、如无专业标准规定。对于检测细菌总数,培养温度采用、35.37、培养时间为、24。48、h，对于检测真菌。培养温度,27,29.培养时间3d.13 布皿和收皿的检测人员必须穿无菌服，但不得穿大褂，头 手均不得裸露，裤管应塞在袜套内。并不得穿拖鞋。14。对培养后的皿上菌落计数时、应采用5,10倍放大镜查看、若有2个或更多的菌落重叠.可分辨时则以2个或多个菌落计数,15。当单皿菌落数太大受到质疑时.可按以下原则之一进行处理.1 作为坏点剔除。2.重测.如结果仍大.以两次平均值为准,如结果很小。可再重测。3,重测该处微粒浓度。参考此结果作出判断，所有上述处理方法均应记录在案。16，每皿平均菌落数取到小数点后1位.17，动态监测时每点叠放多个平皿或采用可自动切换的仪器,每点应采满4h以上.每皿可采30min.当只放1个皿时.可少于4h、但不可少于1h,E.8、4.浮游菌采样应符合下列要求，1 使用单级或多级撞击式采样器。离心采样器或过滤采样器、采样必须按所用仪器说明书的步骤进行 特别要注意检测之前对仪器消毒火菌。并对培养皿或培养基条做阴性对照.2 采样点数应不少于微粒计数浓度测点数。3 采样点应在离地0，8m高平面上均匀布置、或经委托方.用户 与检测方协商确定,乱流洁净室内不得在送风口正下方布点、静态或空态检测前对室内各种表面应作擦拭消毒。4,每点采样1次 如工艺无特殊要求。每次采样量应大于等于表E、8 4推荐的浮游菌最小采样量 每次采样时间不宜超过15min。不应超过30min.当洁净度很高.或预期含菌浓度可能很低时 采样量应大于最小采样量很多，以满足减少计数误差的要求.5、采样器应用支架固定.采样时检测人员应退出，手持离心式采样器除外，检测人员的穿戴同本附录E 8。3条第15款.必须手持采样器时 应将手臂伸直.站于下风向，6、采样后宜在2h之内将采样器中的培养皿或培养基条送入培养箱中培养.7.每点平均值取到小数点后1位 8，动态监测的测点位置。数量和高度由工艺并经协商确定.每间洁净室或每一个独立受控环境中各点总采样量.不分级别、均应大于1m3.每点可用多台采样器 9.单点菌落数太大时 应按附录E.8.3条第15款的原则处理、E，8,5,表面染菌密度检测应符合下列要求,1。对于洁净室内围护结构。设备等表面的微生物采样,应采用无菌棉拭子擦抹法，当表面很大.硬且平时，也可采用接触皿法 2，用规格板标定出面积为25cm2的区块.对于围护结构、每面结构不少于4块，对于设备 每件不少于2块、取样地点均协商确定、3。将无菌棉拭于含10mL稀释液试管中浸湿.于管壁上挤干后。对一区块擦抹采样,横竖往返8次，每一区块使用1根无菌棉拭,采样后 以无菌操作方式将棉拭采样端剪入原稀释液试管中,经电动混匀器震荡20s或在手掌振打200次。4 取含菌液体1、0mL。以琼脂灌注法接种平皿.每个样本接种2个平皿 于 35。37、培养箱中培养，24 48，h后计数。5.必须将本次检测所用的稀释液，棉拭子,培养基等留样作阴性比照，6,具体事项遵照卫生部。消毒技术规范。执行 7,对于适用接触皿采样的表面。以无菌操作方式 先将培养基注入硬质或软质Φ55平皿、使培养基表面高出培养皿周边,测试时，将培养皿倒过来 使培养基表面均匀牢固地按压住整个区域5s，不得有环形或线性的运动，8、对于围护结构 每面结构应用不少于4个培养皿按压。对于设备,每件用不少于2个培养皿按压,9。按压取样后的培养皿.应在2h之内。于、35,37，培养箱中培养，24 48 h后计数,10。菌数平均数取到小数点后1位.