E、8，悬浮微生物的检测E，8.1，悬浮微生物的采样装置有以下两类，1,采用无源采样装置,如培养皿 2。采用有源采样装置,如撞击采样器.离心采样器,过滤采样器,E,8 2.空气洁净环境中悬浮微生物的静态或空态检测前。应对各类表面进行擦拭消毒,但不得对室内空气进行熏蒸。喷洒之类的消毒。动态检测均不得对表面和空气进行消毒,E，8，3、沉降菌检测应符合下列要求 1、使用直径90mm Φ90，的培养皿采样,当采用其他直径培养皿时，应使其总面积和Φ90皿总面积相当，2，培养皿中灌注胰蛋白酶大豆琼脂培养基。必须留样作阴性对照。3,培养皿表面应经适当消毒清洁处理后，布置在有代表性的地点和气流扰动极小的地点、在乱流洁净室内培养皿不应布置在送风口正下方。4,当用户没有特定要求时.培养皿应布置在地面及其以上0,8m之内的任意高度.5。每一间洁净室或每一个控制区应设1个阴性对照皿、6,动态监测时也可协商布点位置和高度 7，培养皿数应不少于微粒计数浓度的测点数，如工艺无特殊要求应大于等于表E 8，3中的最少培养皿数。另外各加1个对照皿,8 当延长沉降时间时.可按比例减少最少培养皿数、为防止脱水,最长沉降时间不宜超过1h 当所需沉降时间超过1h、可重叠多皿连续采样.除非经过验证、证明更长的沉降时间可以基本按比例增加菌落数。9.培养皿应从内向外布置 从外向内收皿、10.每布置完1个皿。皿盖只允许斜放在皿边上 对照皿盖挪开即盖上 11 布皿前和收皿后.均应用双层包装保护培养皿 以防污染,12,收皿后皿应倒置摆放、并应及时放入培养箱培养。在培养箱外时间不宜超过2h，如无专业标准规定,对于检测细菌总数.培养温度采用、35 37，培养时间为.24.48.h。对于检测真菌。培养温度，27.29，培养时间3d 13，布皿和收皿的检测人员必须穿无菌服 但不得穿大褂.头，手均不得裸露，裤管应塞在袜套内，并不得穿拖鞋、14.对培养后的皿上菌落计数时,应采用5、10倍放大镜查看,若有2个或更多的菌落重叠.可分辨时则以2个或多个菌落计数，15，当单皿菌落数太大受到质疑时.可按以下原则之一进行处理,1,作为坏点剔除。2，重测，如结果仍大 以两次平均值为准，如结果很小,可再重测.3。重测该处微粒浓度、参考此结果作出判断,所有上述处理方法均应记录在案。16.每皿平均菌落数取到小数点后1位，17、动态监测时每点叠放多个平皿或采用可自动切换的仪器，每点应采满4h以上，每皿可采30min 当只放1个皿时。可少于4h 但不可少于1h，E、8。4、浮游菌采样应符合下列要求.1.使用单级或多级撞击式采样器，离心采样器或过滤采样器 采样必须按所用仪器说明书的步骤进行 特别要注意检测之前对仪器消毒火菌 并对培养皿或培养基条做阴性对照,2,采样点数应不少于微粒计数浓度测点数,3,采样点应在离地0。8m高平面上均匀布置。或经委托方,用户,与检测方协商确定,乱流洁净室内不得在送风口正下方布点 静态或空态检测前对室内各种表面应作擦拭消毒 4,每点采样1次,如工艺无特殊要求.每次采样量应大于等于表E，8，4推荐的浮游菌最小采样量 每次采样时间不宜超过15min、不应超过30min,当洁净度很高.或预期含菌浓度可能很低时,采样量应大于最小采样量很多，以满足减少计数误差的要求,5.采样器应用支架固定、采样时检测人员应退出。手持离心式采样器除外 检测人员的穿戴同本附录E、8、3条第15款。必须手持采样器时 应将手臂伸直,站于下风向.6，采样后宜在2h之内将采样器中的培养皿或培养基条送入培养箱中培养.7 每点平均值取到小数点后1位。8，动态监测的测点位置,数量和高度由工艺并经协商确定.每间洁净室或每一个独立受控环境中各点总采样量。不分级别，均应大于1m3 每点可用多台采样器。9,单点菌落数太大时，应按附录E、8.3条第15款的原则处理，E,8.5、表面染菌密度检测应符合下列要求 1。对于洁净室内围护结构、设备等表面的微生物采样.应采用无菌棉拭子擦抹法 当表面很大，硬且平时，也可采用接触皿法 2。用规格板标定出面积为25cm2的区块，对于围护结构。每面结构不少于4块、对于设备 每件不少于2块、取样地点均协商确定，3.将无菌棉拭于含10mL稀释液试管中浸湿,于管壁上挤干后，对一区块擦抹采样。横竖往返8次，每一区块使用1根无菌棉拭.采样后.以无菌操作方式将棉拭采样端剪入原稀释液试管中，经电动混匀器震荡20s或在手掌振打200次、4.取含菌液体1 0mL.以琼脂灌注法接种平皿，每个样本接种2个平皿.于。35。37、培养箱中培养.24。48。h后计数，5、必须将本次检测所用的稀释液 棉拭子,培养基等留样作阴性比照 6,具体事项遵照卫生部,消毒技术规范。执行 7,对于适用接触皿采样的表面,以无菌操作方式，先将培养基注入硬质或软质Φ55平皿。使培养基表面高出培养皿周边 测试时,将培养皿倒过来.使培养基表面均匀牢固地按压住整个区域5s,不得有环形或线性的运动 8。对于围护结构,每面结构应用不少于4个培养皿按压，对于设备 每件用不少于2个培养皿按压 9,按压取样后的培养皿,应在2h之内、于 35。37,培养箱中培养,24.48。h后计数.10.菌数平均数取到小数点后1位,