E。8,悬浮微生物的检测E.8，1、悬浮微生物的采样装置有以下两类、1、采用无源采样装置。如培养皿、2，采用有源采样装置.如撞击采样器。离心采样器。过滤采样器,E.8,2。空气洁净环境中悬浮微生物的静态或空态检测前.应对各类表面进行擦拭消毒,但不得对室内空气进行熏蒸、喷洒之类的消毒。动态检测均不得对表面和空气进行消毒。E，8 3,沉降菌检测应符合下列要求.1.使用直径90mm、Φ90。的培养皿采样,当采用其他直径培养皿时，应使其总面积和Φ90皿总面积相当、2.培养皿中灌注胰蛋白酶大豆琼脂培养基。必须留样作阴性对照.3.培养皿表面应经适当消毒清洁处理后，布置在有代表性的地点和气流扰动极小的地点,在乱流洁净室内培养皿不应布置在送风口正下方.4 当用户没有特定要求时.培养皿应布置在地面及其以上0，8m之内的任意高度，5。每一间洁净室或每一个控制区应设1个阴性对照皿。6。动态监测时也可协商布点位置和高度 7,培养皿数应不少于微粒计数浓度的测点数.如工艺无特殊要求应大于等于表E，8 3中的最少培养皿数.另外各加1个对照皿 8,当延长沉降时间时。可按比例减少最少培养皿数,为防止脱水、最长沉降时间不宜超过1h、当所需沉降时间超过1h，可重叠多皿连续采样。除非经过验证。证明更长的沉降时间可以基本按比例增加菌落数,9,培养皿应从内向外布置、从外向内收皿,10、每布置完1个皿.皿盖只允许斜放在皿边上 对照皿盖挪开即盖上.11 布皿前和收皿后、均应用双层包装保护培养皿,以防污染,12。收皿后皿应倒置摆放。并应及时放入培养箱培养 在培养箱外时间不宜超过2h、如无专业标准规定,对于检测细菌总数、培养温度采用 35、37.培养时间为,24 48。h 对于检测真菌、培养温度.27,29，培养时间3d 13、布皿和收皿的检测人员必须穿无菌服、但不得穿大褂。头.手均不得裸露.裤管应塞在袜套内，并不得穿拖鞋、14。对培养后的皿上菌落计数时，应采用5.10倍放大镜查看 若有2个或更多的菌落重叠，可分辨时则以2个或多个菌落计数、15.当单皿菌落数太大受到质疑时、可按以下原则之一进行处理.1、作为坏点剔除 2，重测。如结果仍大.以两次平均值为准,如结果很小，可再重测.3.重测该处微粒浓度 参考此结果作出判断,所有上述处理方法均应记录在案.16。每皿平均菌落数取到小数点后1位,17,动态监测时每点叠放多个平皿或采用可自动切换的仪器 每点应采满4h以上,每皿可采30min,当只放1个皿时,可少于4h，但不可少于1h、E.8.4，浮游菌采样应符合下列要求,1、使用单级或多级撞击式采样器。离心采样器或过滤采样器，采样必须按所用仪器说明书的步骤进行、特别要注意检测之前对仪器消毒火菌,并对培养皿或培养基条做阴性对照，2。采样点数应不少于微粒计数浓度测点数.3，采样点应在离地0,8m高平面上均匀布置、或经委托方.用户。与检测方协商确定。乱流洁净室内不得在送风口正下方布点.静态或空态检测前对室内各种表面应作擦拭消毒，4、每点采样1次,如工艺无特殊要求、每次采样量应大于等于表E。8。4推荐的浮游菌最小采样量,每次采样时间不宜超过15min。不应超过30min，当洁净度很高,或预期含菌浓度可能很低时。采样量应大于最小采样量很多、以满足减少计数误差的要求.5。采样器应用支架固定、采样时检测人员应退出,手持离心式采样器除外。检测人员的穿戴同本附录E 8,3条第15款、必须手持采样器时、应将手臂伸直 站于下风向 6.采样后宜在2h之内将采样器中的培养皿或培养基条送入培养箱中培养.7 每点平均值取到小数点后1位 8 动态监测的测点位置,数量和高度由工艺并经协商确定，每间洁净室或每一个独立受控环境中各点总采样量。不分级别、均应大于1m3、每点可用多台采样器，9,单点菌落数太大时,应按附录E.8 3条第15款的原则处理。E 8、5 表面染菌密度检测应符合下列要求 1.对于洁净室内围护结构、设备等表面的微生物采样.应采用无菌棉拭子擦抹法.当表面很大。硬且平时.也可采用接触皿法 2，用规格板标定出面积为25cm2的区块.对于围护结构。每面结构不少于4块.对于设备 每件不少于2块，取样地点均协商确定、3，将无菌棉拭于含10mL稀释液试管中浸湿。于管壁上挤干后。对一区块擦抹采样。横竖往返8次。每一区块使用1根无菌棉拭。采样后,以无菌操作方式将棉拭采样端剪入原稀释液试管中、经电动混匀器震荡20s或在手掌振打200次.4,取含菌液体1。0mL。以琼脂灌注法接种平皿、每个样本接种2个平皿，于，35、37。培养箱中培养,24、48,h后计数。5、必须将本次检测所用的稀释液 棉拭子。培养基等留样作阴性比照、6。具体事项遵照卫生部,消毒技术规范 执行.7.对于适用接触皿采样的表面,以无菌操作方式，先将培养基注入硬质或软质Φ55平皿、使培养基表面高出培养皿周边。测试时。将培养皿倒过来.使培养基表面均匀牢固地按压住整个区域5s 不得有环形或线性的运动.8，对于围护结构、每面结构应用不少于4个培养皿按压 对于设备、每件用不少于2个培养皿按压。9.按压取样后的培养皿，应在2h之内 于 35.37,培养箱中培养 24 48，h后计数。10，菌数平均数取到小数点后1位.