E,8，悬浮微生物的检测E,8.1 悬浮微生物的采样装置有以下两类、1、采用无源采样装置,如培养皿 2。采用有源采样装置，如撞击采样器 离心采样器、过滤采样器.E,8.2 空气洁净环境中悬浮微生物的静态或空态检测前，应对各类表面进行擦拭消毒。但不得对室内空气进行熏蒸.喷洒之类的消毒、动态检测均不得对表面和空气进行消毒.E.8 3,沉降菌检测应符合下列要求、1.使用直径90mm,Φ90。的培养皿采样。当采用其他直径培养皿时,应使其总面积和Φ90皿总面积相当.2 培养皿中灌注胰蛋白酶大豆琼脂培养基 必须留样作阴性对照,3、培养皿表面应经适当消毒清洁处理后，布置在有代表性的地点和气流扰动极小的地点，在乱流洁净室内培养皿不应布置在送风口正下方，4。当用户没有特定要求时 培养皿应布置在地面及其以上0、8m之内的任意高度,5,每一间洁净室或每一个控制区应设1个阴性对照皿.6、动态监测时也可协商布点位置和高度,7、培养皿数应不少于微粒计数浓度的测点数、如工艺无特殊要求应大于等于表E 8.3中的最少培养皿数、另外各加1个对照皿，8，当延长沉降时间时 可按比例减少最少培养皿数，为防止脱水、最长沉降时间不宜超过1h,当所需沉降时间超过1h.可重叠多皿连续采样。除非经过验证。证明更长的沉降时间可以基本按比例增加菌落数.9 培养皿应从内向外布置.从外向内收皿。10 每布置完1个皿 皿盖只允许斜放在皿边上 对照皿盖挪开即盖上.11。布皿前和收皿后,均应用双层包装保护培养皿.以防污染,12,收皿后皿应倒置摆放.并应及时放入培养箱培养 在培养箱外时间不宜超过2h，如无专业标准规定.对于检测细菌总数。培养温度采用。35.37 培养时间为。24，48、h。对于检测真菌,培养温度，27 29.培养时间3d 13。布皿和收皿的检测人员必须穿无菌服 但不得穿大褂。头 手均不得裸露。裤管应塞在袜套内、并不得穿拖鞋，14 对培养后的皿上菌落计数时、应采用5 10倍放大镜查看。若有2个或更多的菌落重叠。可分辨时则以2个或多个菌落计数.15、当单皿菌落数太大受到质疑时 可按以下原则之一进行处理、1。作为坏点剔除 2,重测 如结果仍大。以两次平均值为准、如结果很小。可再重测.3，重测该处微粒浓度，参考此结果作出判断.所有上述处理方法均应记录在案 16 每皿平均菌落数取到小数点后1位、17，动态监测时每点叠放多个平皿或采用可自动切换的仪器,每点应采满4h以上 每皿可采30min。当只放1个皿时 可少于4h、但不可少于1h E,8。4,浮游菌采样应符合下列要求,1、使用单级或多级撞击式采样器.离心采样器或过滤采样器，采样必须按所用仪器说明书的步骤进行，特别要注意检测之前对仪器消毒火菌.并对培养皿或培养基条做阴性对照、2.采样点数应不少于微粒计数浓度测点数、3.采样点应在离地0 8m高平面上均匀布置.或经委托方、用户、与检测方协商确定、乱流洁净室内不得在送风口正下方布点，静态或空态检测前对室内各种表面应作擦拭消毒.4.每点采样1次.如工艺无特殊要求 每次采样量应大于等于表E。8.4推荐的浮游菌最小采样量,每次采样时间不宜超过15min,不应超过30min.当洁净度很高。或预期含菌浓度可能很低时。采样量应大于最小采样量很多。以满足减少计数误差的要求、5。采样器应用支架固定 采样时检测人员应退出,手持离心式采样器除外.检测人员的穿戴同本附录E 8 3条第15款，必须手持采样器时。应将手臂伸直、站于下风向。6、采样后宜在2h之内将采样器中的培养皿或培养基条送入培养箱中培养.7 每点平均值取到小数点后1位,8。动态监测的测点位置 数量和高度由工艺并经协商确定、每间洁净室或每一个独立受控环境中各点总采样量。不分级别。均应大于1m3，每点可用多台采样器，9,单点菌落数太大时。应按附录E，8。3条第15款的原则处理 E，8、5.表面染菌密度检测应符合下列要求 1,对于洁净室内围护结构，设备等表面的微生物采样，应采用无菌棉拭子擦抹法、当表面很大，硬且平时、也可采用接触皿法、2 用规格板标定出面积为25cm2的区块 对于围护结构、每面结构不少于4块，对于设备,每件不少于2块 取样地点均协商确定。3 将无菌棉拭于含10mL稀释液试管中浸湿，于管壁上挤干后。对一区块擦抹采样，横竖往返8次、每一区块使用1根无菌棉拭。采样后、以无菌操作方式将棉拭采样端剪入原稀释液试管中 经电动混匀器震荡20s或在手掌振打200次,4、取含菌液体1。0mL。以琼脂灌注法接种平皿.每个样本接种2个平皿.于，35 37，培养箱中培养、24、48 h后计数,5。必须将本次检测所用的稀释液。棉拭子,培养基等留样作阴性比照、6.具体事项遵照卫生部,消毒技术规范、执行。7，对于适用接触皿采样的表面,以无菌操作方式，先将培养基注入硬质或软质Φ55平皿。使培养基表面高出培养皿周边,测试时.将培养皿倒过来 使培养基表面均匀牢固地按压住整个区域5s、不得有环形或线性的运动 8 对于围护结构，每面结构应用不少于4个培养皿按压。对于设备。每件用不少于2个培养皿按压。9.按压取样后的培养皿，应在2h之内。于。35,37.培养箱中培养 24。48、h后计数，10 菌数平均数取到小数点后1位,