附录A、规范性附录。灭菌效果检测方法A,1、方法原理。本试验以常见的硬式镜不锈钢材料管腔、软式镜聚四氟乙烯材料管腔为模拟管腔、验证微生物的灭菌效果,本试验应采用两端开口的无缝测试管腔、如有接缝，则应保证气密性。在管腔中央放置染有细菌芽孢的载体.通过半周期灭菌循环、无菌生长,以嗜热脂肪杆菌芽孢为指标菌.同时进行微生物灭菌效果评价,所有试验均为阴性培养结果、则判定结果合格,A 2.生物指示物，嗜热脂肪杆菌芽孢、ATCC7953.A，3、验证器材A.3 1 载体.将芽孢液均匀涂布在直径为0、4mm，长度为20mm.30mm不锈钢检测材质上.以染菌后不堵塞管腔为限，嗜热脂肪杆菌芽孢阳性回收菌量应为1,106CFU.载体,5、106CFU,载体.室温下自然干燥后再使用、A,3，2.检测管腔、本试验宜采用两端开口的无缝测试管腔、如有接缝，则应保证气密性、A、3 3 不锈钢材质无接缝管腔。10根、A,3,4 聚四氟乙烯无接缝管腔.10根.A 3.5 嗜热脂肪杆菌芽孢的TSB培养基、干粉胰蛋白胨17，0g,植物蛋白胨3 0g.氯化钠5,0g，磷酸氢二钾2,5g 葡萄糖2,5g 共30g溶于1L蒸馏水中,制成胰蛋白胨大豆肉汤，TSB 培养基。A，4 操作步骤A.4,1。将染菌的载体送达不锈钢管腔的正中央,制作10根测试样本。将10根测试样本均匀平行摆放在器械盒内、用双层无纺布包裹、放置在灭菌舱内,灭菌舱内如仅一层隔架 则10根样本平行摆放在器械盒内放置在灭菌舱中央，见图A。1,若灭菌舱内可摆放上下两层隔架,则将10根样本均匀摆放在两个器械盒内，分别放置在灭菌舱内上下两层隔架中央 见图A，2、按照 消毒技术规范.2002版，中的灭菌操作步骤进行半周期灭菌.灭菌结束后以无菌操作取出细菌芽孢载体。均放到TSB培养基中、56 培养48h、观察培养结果、如无细菌生长则继续培养至7d、培养结果仍无细菌生长则判断为阴性,A。4，2。将染菌的体用细丝送达聚四氟乙烯管腔的正中间 制作10根测试样本.将10根测试样本均匀平行摆放在器械盒内.用双层无纺布包裹 放置在灭菌舱内 灭菌舱内如仅一层隔架，则10根样本平行摆放在器械盒内放置在灭菌舱中央、见图A.3、若灭菌舱内可摆放上下两层隔架。则将10根样本均匀摆放在两个器械盒内 分别放置在灭菌舱内上下两层隔架中央.见图A.4。按照 消毒技术规范 2002年版、中的灭菌操作步骤进行半周期灭菌,灭菌结束后取出细菌芽孢载体.全部放到TSB培养基中.56,培养48h、观察培养结果如无细菌生长则继续培养至7d 培养结果仍无细菌生长则判定阴性。A，5。结果计算，嗜热脂肪杆菌芽孢重复以上两种材质的模拟管腔。微生物测试各重复5次，A 6、结果判定 测试结果均无细菌生长.为阴性。则判定无菌合格，