附录A.规范性附录，灭菌效果检测方法A.1 方法原理，本试验以常见的硬式镜不锈钢材料管腔,软式镜聚四氟乙烯材料管腔为模拟管腔.验证微生物的灭菌效果，本试验应采用两端开口的无缝测试管腔。如有接缝.则应保证气密性，在管腔中央放置染有细菌芽孢的载体，通过半周期灭菌循环,无菌生长，以嗜热脂肪杆菌芽孢为指标菌 同时进行微生物灭菌效果评价。所有试验均为阴性培养结果。则判定结果合格，A.2.生物指示物.嗜热脂肪杆菌芽孢,ATCC7953,A。3.验证器材A。3。1。载体。将芽孢液均匀涂布在直径为0，4mm。长度为20mm 30mm不锈钢检测材质上 以染菌后不堵塞管腔为限 嗜热脂肪杆菌芽孢阳性回收菌量应为1。106CFU，载体、5、106CFU 载体 室温下自然干燥后再使用，A、3、2.检测管腔 本试验宜采用两端开口的无缝测试管腔 如有接缝。则应保证气密性，A，3 3 不锈钢材质无接缝管腔 10根、A，3、4.聚四氟乙烯无接缝管腔。10根，A，3,5、嗜热脂肪杆菌芽孢的TSB培养基。干粉胰蛋白胨17。0g 植物蛋白胨3，0g.氯化钠5.0g,磷酸氢二钾2,5g，葡萄糖2.5g.共30g溶于1L蒸馏水中，制成胰蛋白胨大豆肉汤、TSB,培养基 A。4.操作步骤A。4、1 将染菌的载体送达不锈钢管腔的正中央 制作10根测试样本 将10根测试样本均匀平行摆放在器械盒内，用双层无纺布包裹，放置在灭菌舱内。灭菌舱内如仅一层隔架。则10根样本平行摆放在器械盒内放置在灭菌舱中央，见图A,1、若灭菌舱内可摆放上下两层隔架。则将10根样本均匀摆放在两个器械盒内，分别放置在灭菌舱内上下两层隔架中央。见图A 2,按照。消毒技术规范，2002版 中的灭菌操作步骤进行半周期灭菌,灭菌结束后以无菌操作取出细菌芽孢载体，均放到TSB培养基中。56。培养48h。观察培养结果 如无细菌生长则继续培养至7d。培养结果仍无细菌生长则判断为阴性，A，4 2，将染菌的体用细丝送达聚四氟乙烯管腔的正中间 制作10根测试样本。将10根测试样本均匀平行摆放在器械盒内、用双层无纺布包裹。放置在灭菌舱内、灭菌舱内如仅一层隔架,则10根样本平行摆放在器械盒内放置在灭菌舱中央 见图A，3、若灭菌舱内可摆放上下两层隔架，则将10根样本均匀摆放在两个器械盒内。分别放置在灭菌舱内上下两层隔架中央，见图A。4 按照，消毒技术规范。2002年版。中的灭菌操作步骤进行半周期灭菌。灭菌结束后取出细菌芽孢载体.全部放到TSB培养基中、56 培养48h，观察培养结果如无细菌生长则继续培养至7d，培养结果仍无细菌生长则判定阴性.A、5，结果计算、嗜热脂肪杆菌芽孢重复以上两种材质的模拟管腔、微生物测试各重复5次 A,6,结果判定、测试结果均无细菌生长。为阴性,则判定无菌合格。