附录A。规范性附录.灭菌效果检测方法A、1、方法原理.本试验以常见的硬式镜不锈钢材料管腔 软式镜聚四氟乙烯材料管腔为模拟管腔 验证微生物的灭菌效果，本试验应采用两端开口的无缝测试管腔.如有接缝，则应保证气密性,在管腔中央放置染有细菌芽孢的载体.通过半周期灭菌循环 无菌生长 以嗜热脂肪杆菌芽孢为指标菌.同时进行微生物灭菌效果评价.所有试验均为阴性培养结果、则判定结果合格 A.2。生物指示物。嗜热脂肪杆菌芽孢，ATCC7953.A 3，验证器材A,3、1 载体,将芽孢液均匀涂布在直径为0.4mm、长度为20mm,30mm不锈钢检测材质上,以染菌后不堵塞管腔为限,嗜热脂肪杆菌芽孢阳性回收菌量应为1。106CFU 载体，5，106CFU，载体，室温下自然干燥后再使用，A、3,2 检测管腔，本试验宜采用两端开口的无缝测试管腔.如有接缝，则应保证气密性 A，3.3，不锈钢材质无接缝管腔.10根，A.3 4 聚四氟乙烯无接缝管腔,10根、A，3.5,嗜热脂肪杆菌芽孢的TSB培养基,干粉胰蛋白胨17。0g,植物蛋白胨3、0g 氯化钠5，0g、磷酸氢二钾2.5g、葡萄糖2。5g，共30g溶于1L蒸馏水中，制成胰蛋白胨大豆肉汤。TSB 培养基.A。4.操作步骤A，4 1.将染菌的载体送达不锈钢管腔的正中央 制作10根测试样本，将10根测试样本均匀平行摆放在器械盒内.用双层无纺布包裹。放置在灭菌舱内,灭菌舱内如仅一层隔架、则10根样本平行摆放在器械盒内放置在灭菌舱中央.见图A。1，若灭菌舱内可摆放上下两层隔架 则将10根样本均匀摆放在两个器械盒内.分别放置在灭菌舱内上下两层隔架中央,见图A、2。按照。消毒技术规范.2002版,中的灭菌操作步骤进行半周期灭菌。灭菌结束后以无菌操作取出细菌芽孢载体，均放到TSB培养基中,56.培养48h。观察培养结果、如无细菌生长则继续培养至7d，培养结果仍无细菌生长则判断为阴性,A。4,2.将染菌的体用细丝送达聚四氟乙烯管腔的正中间，制作10根测试样本.将10根测试样本均匀平行摆放在器械盒内，用双层无纺布包裹，放置在灭菌舱内.灭菌舱内如仅一层隔架 则10根样本平行摆放在器械盒内放置在灭菌舱中央。见图A.3.若灭菌舱内可摆放上下两层隔架 则将10根样本均匀摆放在两个器械盒内.分别放置在灭菌舱内上下两层隔架中央。见图A、4.按照。消毒技术规范 2002年版.中的灭菌操作步骤进行半周期灭菌。灭菌结束后取出细菌芽孢载体.全部放到TSB培养基中,56.培养48h,观察培养结果如无细菌生长则继续培养至7d。培养结果仍无细菌生长则判定阴性，A,5、结果计算,嗜热脂肪杆菌芽孢重复以上两种材质的模拟管腔.微生物测试各重复5次.A。6,结果判定 测试结果均无细菌生长.为阴性,则判定无菌合格