附录A、规范性附录.灭菌效果检测方法A、1 方法原理.本试验以常见的硬式镜不锈钢材料管腔，软式镜聚四氟乙烯材料管腔为模拟管腔。验证微生物的灭菌效果。本试验应采用两端开口的无缝测试管腔 如有接缝，则应保证气密性，在管腔中央放置染有细菌芽孢的载体，通过半周期灭菌循环.无菌生长.以嗜热脂肪杆菌芽孢为指标菌、同时进行微生物灭菌效果评价 所有试验均为阴性培养结果,则判定结果合格，A.2、生物指示物.嗜热脂肪杆菌芽孢.ATCC7953,A，3.验证器材A。3、1 载体、将芽孢液均匀涂布在直径为0。4mm，长度为20mm、30mm不锈钢检测材质上,以染菌后不堵塞管腔为限,嗜热脂肪杆菌芽孢阳性回收菌量应为1 106CFU、载体.5,106CFU,载体。室温下自然干燥后再使用 A。3，2。检测管腔，本试验宜采用两端开口的无缝测试管腔.如有接缝，则应保证气密性,A 3,3、不锈钢材质无接缝管腔 10根，A.3 4。聚四氟乙烯无接缝管腔，10根，A。3，5、嗜热脂肪杆菌芽孢的TSB培养基，干粉胰蛋白胨17.0g、植物蛋白胨3 0g.氯化钠5，0g，磷酸氢二钾2.5g,葡萄糖2，5g,共30g溶于1L蒸馏水中。制成胰蛋白胨大豆肉汤，TSB 培养基，A,4 操作步骤A 4,1 将染菌的载体送达不锈钢管腔的正中央.制作10根测试样本,将10根测试样本均匀平行摆放在器械盒内、用双层无纺布包裹.放置在灭菌舱内.灭菌舱内如仅一层隔架，则10根样本平行摆放在器械盒内放置在灭菌舱中央，见图A。1、若灭菌舱内可摆放上下两层隔架。则将10根样本均匀摆放在两个器械盒内,分别放置在灭菌舱内上下两层隔架中央、见图A、2，按照，消毒技术规范.2002版、中的灭菌操作步骤进行半周期灭菌。灭菌结束后以无菌操作取出细菌芽孢载体、均放到TSB培养基中,56 培养48h，观察培养结果、如无细菌生长则继续培养至7d.培养结果仍无细菌生长则判断为阴性.A.4 2、将染菌的体用细丝送达聚四氟乙烯管腔的正中间.制作10根测试样本,将10根测试样本均匀平行摆放在器械盒内，用双层无纺布包裹.放置在灭菌舱内。灭菌舱内如仅一层隔架，则10根样本平行摆放在器械盒内放置在灭菌舱中央。见图A，3 若灭菌舱内可摆放上下两层隔架,则将10根样本均匀摆放在两个器械盒内，分别放置在灭菌舱内上下两层隔架中央。见图A,4。按照 消毒技术规范、2002年版。中的灭菌操作步骤进行半周期灭菌。灭菌结束后取出细菌芽孢载体.全部放到TSB培养基中,56，培养48h、观察培养结果如无细菌生长则继续培养至7d，培养结果仍无细菌生长则判定阴性.A,5 结果计算 嗜热脂肪杆菌芽孢重复以上两种材质的模拟管腔,微生物测试各重复5次。A,6 结果判定 测试结果均无细菌生长，为阴性、则判定无菌合格.