附录A、规范性附录,灭菌效果检测方法A，1.方法原理 本试验以常见的硬式镜不锈钢材料管腔 软式镜聚四氟乙烯材料管腔为模拟管腔。验证微生物的灭菌效果.本试验应采用两端开口的无缝测试管腔、如有接缝、则应保证气密性。在管腔中央放置染有细菌芽孢的载体,通过半周期灭菌循环 无菌生长、以嗜热脂肪杆菌芽孢为指标菌.同时进行微生物灭菌效果评价 所有试验均为阴性培养结果 则判定结果合格。A 2 生物指示物。嗜热脂肪杆菌芽孢 ATCC7953。A、3。验证器材A，3。1 载体。将芽孢液均匀涂布在直径为0 4mm 长度为20mm,30mm不锈钢检测材质上、以染菌后不堵塞管腔为限、嗜热脂肪杆菌芽孢阳性回收菌量应为1 106CFU。载体,5.106CFU。载体,室温下自然干燥后再使用、A、3.2 检测管腔、本试验宜采用两端开口的无缝测试管腔.如有接缝、则应保证气密性、A，3，3 不锈钢材质无接缝管腔 10根，A，3。4、聚四氟乙烯无接缝管腔 10根、A。3，5.嗜热脂肪杆菌芽孢的TSB培养基，干粉胰蛋白胨17，0g、植物蛋白胨3 0g。氯化钠5，0g。磷酸氢二钾2、5g。葡萄糖2 5g。共30g溶于1L蒸馏水中,制成胰蛋白胨大豆肉汤、TSB,培养基，A，4。操作步骤A 4、1、将染菌的载体送达不锈钢管腔的正中央，制作10根测试样本，将10根测试样本均匀平行摆放在器械盒内、用双层无纺布包裹,放置在灭菌舱内,灭菌舱内如仅一层隔架、则10根样本平行摆放在器械盒内放置在灭菌舱中央，见图A.1。若灭菌舱内可摆放上下两层隔架，则将10根样本均匀摆放在两个器械盒内。分别放置在灭菌舱内上下两层隔架中央，见图A、2.按照，消毒技术规范，2002版、中的灭菌操作步骤进行半周期灭菌,灭菌结束后以无菌操作取出细菌芽孢载体.均放到TSB培养基中。56，培养48h 观察培养结果。如无细菌生长则继续培养至7d.培养结果仍无细菌生长则判断为阴性.A 4.2。将染菌的体用细丝送达聚四氟乙烯管腔的正中间、制作10根测试样本。将10根测试样本均匀平行摆放在器械盒内、用双层无纺布包裹 放置在灭菌舱内.灭菌舱内如仅一层隔架、则10根样本平行摆放在器械盒内放置在灭菌舱中央,见图A,3.若灭菌舱内可摆放上下两层隔架、则将10根样本均匀摆放在两个器械盒内、分别放置在灭菌舱内上下两层隔架中央，见图A 4、按照.消毒技术规范 2002年版.中的灭菌操作步骤进行半周期灭菌 灭菌结束后取出细菌芽孢载体。全部放到TSB培养基中。56、培养48h,观察培养结果如无细菌生长则继续培养至7d、培养结果仍无细菌生长则判定阴性,A。5.结果计算。嗜热脂肪杆菌芽孢重复以上两种材质的模拟管腔，微生物测试各重复5次。A。6，结果判定。测试结果均无细菌生长。为阴性,则判定无菌合格、