附录A,规范性附录，灭菌效果检测方法A，1.方法原理，本试验以常见的硬式镜不锈钢材料管腔。软式镜聚四氟乙烯材料管腔为模拟管腔.验证微生物的灭菌效果.本试验应采用两端开口的无缝测试管腔、如有接缝，则应保证气密性 在管腔中央放置染有细菌芽孢的载体。通过半周期灭菌循环、无菌生长.以嗜热脂肪杆菌芽孢为指标菌，同时进行微生物灭菌效果评价、所有试验均为阴性培养结果，则判定结果合格,A、2、生物指示物。嗜热脂肪杆菌芽孢、ATCC7953,A，3 验证器材A、3。1、载体。将芽孢液均匀涂布在直径为0、4mm 长度为20mm，30mm不锈钢检测材质上、以染菌后不堵塞管腔为限,嗜热脂肪杆菌芽孢阳性回收菌量应为1 106CFU，载体，5.106CFU。载体,室温下自然干燥后再使用 A.3。2、检测管腔、本试验宜采用两端开口的无缝测试管腔，如有接缝.则应保证气密性,A 3，3,不锈钢材质无接缝管腔,10根,A 3。4。聚四氟乙烯无接缝管腔。10根,A、3.5 嗜热脂肪杆菌芽孢的TSB培养基、干粉胰蛋白胨17。0g,植物蛋白胨3.0g.氯化钠5.0g.磷酸氢二钾2、5g 葡萄糖2。5g 共30g溶于1L蒸馏水中 制成胰蛋白胨大豆肉汤.TSB 培养基.A.4，操作步骤A、4，1。将染菌的载体送达不锈钢管腔的正中央。制作10根测试样本 将10根测试样本均匀平行摆放在器械盒内、用双层无纺布包裹.放置在灭菌舱内、灭菌舱内如仅一层隔架，则10根样本平行摆放在器械盒内放置在灭菌舱中央、见图A、1.若灭菌舱内可摆放上下两层隔架,则将10根样本均匀摆放在两个器械盒内，分别放置在灭菌舱内上下两层隔架中央、见图A.2,按照,消毒技术规范，2002版。中的灭菌操作步骤进行半周期灭菌。灭菌结束后以无菌操作取出细菌芽孢载体,均放到TSB培养基中 56,培养48h。观察培养结果 如无细菌生长则继续培养至7d。培养结果仍无细菌生长则判断为阴性。A。4，2 将染菌的体用细丝送达聚四氟乙烯管腔的正中间.制作10根测试样本、将10根测试样本均匀平行摆放在器械盒内 用双层无纺布包裹。放置在灭菌舱内，灭菌舱内如仅一层隔架，则10根样本平行摆放在器械盒内放置在灭菌舱中央.见图A、3，若灭菌舱内可摆放上下两层隔架，则将10根样本均匀摆放在两个器械盒内、分别放置在灭菌舱内上下两层隔架中央。见图A、4、按照,消毒技术规范、2002年版 中的灭菌操作步骤进行半周期灭菌,灭菌结束后取出细菌芽孢载体，全部放到TSB培养基中.56 培养48h。观察培养结果如无细菌生长则继续培养至7d。培养结果仍无细菌生长则判定阴性,A.5.结果计算。嗜热脂肪杆菌芽孢重复以上两种材质的模拟管腔 微生物测试各重复5次,A.6，结果判定.测试结果均无细菌生长 为阴性、则判定无菌合格。