附录A,规范性附录。灭菌效果检测方法A。1.方法原理,本试验以常见的硬式镜不锈钢材料管腔。软式镜聚四氟乙烯材料管腔为模拟管腔.验证微生物的灭菌效果,本试验应采用两端开口的无缝测试管腔 如有接缝 则应保证气密性 在管腔中央放置染有细菌芽孢的载体，通过半周期灭菌循环、无菌生长.以嗜热脂肪杆菌芽孢为指标菌，同时进行微生物灭菌效果评价、所有试验均为阴性培养结果 则判定结果合格，A，2，生物指示物 嗜热脂肪杆菌芽孢，ATCC7953、A，3，验证器材A.3.1。载体、将芽孢液均匀涂布在直径为0,4mm。长度为20mm，30mm不锈钢检测材质上。以染菌后不堵塞管腔为限 嗜热脂肪杆菌芽孢阳性回收菌量应为1、106CFU。载体，5、106CFU、载体.室温下自然干燥后再使用、A，3 2。检测管腔,本试验宜采用两端开口的无缝测试管腔，如有接缝 则应保证气密性，A、3,3.不锈钢材质无接缝管腔.10根。A、3。4.聚四氟乙烯无接缝管腔，10根、A。3.5、嗜热脂肪杆菌芽孢的TSB培养基，干粉胰蛋白胨17，0g 植物蛋白胨3.0g，氯化钠5。0g、磷酸氢二钾2、5g。葡萄糖2。5g。共30g溶于1L蒸馏水中.制成胰蛋白胨大豆肉汤、TSB.培养基.A.4，操作步骤A，4 1.将染菌的载体送达不锈钢管腔的正中央,制作10根测试样本，将10根测试样本均匀平行摆放在器械盒内、用双层无纺布包裹，放置在灭菌舱内.灭菌舱内如仅一层隔架。则10根样本平行摆放在器械盒内放置在灭菌舱中央.见图A.1,若灭菌舱内可摆放上下两层隔架、则将10根样本均匀摆放在两个器械盒内、分别放置在灭菌舱内上下两层隔架中央.见图A。2 按照，消毒技术规范,2002版 中的灭菌操作步骤进行半周期灭菌、灭菌结束后以无菌操作取出细菌芽孢载体.均放到TSB培养基中。56,培养48h.观察培养结果.如无细菌生长则继续培养至7d、培养结果仍无细菌生长则判断为阴性，A,4，2,将染菌的体用细丝送达聚四氟乙烯管腔的正中间、制作10根测试样本,将10根测试样本均匀平行摆放在器械盒内 用双层无纺布包裹，放置在灭菌舱内。灭菌舱内如仅一层隔架 则10根样本平行摆放在器械盒内放置在灭菌舱中央、见图A 3、若灭菌舱内可摆放上下两层隔架.则将10根样本均匀摆放在两个器械盒内,分别放置在灭菌舱内上下两层隔架中央。见图A.4。按照.消毒技术规范，2002年版.中的灭菌操作步骤进行半周期灭菌、灭菌结束后取出细菌芽孢载体，全部放到TSB培养基中 56,培养48h，观察培养结果如无细菌生长则继续培养至7d.培养结果仍无细菌生长则判定阴性、A 5、结果计算，嗜热脂肪杆菌芽孢重复以上两种材质的模拟管腔，微生物测试各重复5次、A 6 结果判定.测试结果均无细菌生长、为阴性，则判定无菌合格、