附录A、规范性附录，灭菌效果检测方法A。1.方法原理.本试验以常见的硬式镜不锈钢材料管腔、软式镜聚四氟乙烯材料管腔为模拟管腔,验证微生物的灭菌效果,本试验应采用两端开口的无缝测试管腔。如有接缝、则应保证气密性.在管腔中央放置染有细菌芽孢的载体.通过半周期灭菌循环,无菌生长。以嗜热脂肪杆菌芽孢为指标菌、同时进行微生物灭菌效果评价.所有试验均为阴性培养结果、则判定结果合格.A.2，生物指示物 嗜热脂肪杆菌芽孢、ATCC7953。A 3,验证器材A,3，1、载体。将芽孢液均匀涂布在直径为0.4mm.长度为20mm，30mm不锈钢检测材质上、以染菌后不堵塞管腔为限、嗜热脂肪杆菌芽孢阳性回收菌量应为1 106CFU,载体、5、106CFU。载体.室温下自然干燥后再使用，A、3。2.检测管腔 本试验宜采用两端开口的无缝测试管腔。如有接缝，则应保证气密性,A.3。3 不锈钢材质无接缝管腔.10根。A，3，4,聚四氟乙烯无接缝管腔。10根。A.3.5。嗜热脂肪杆菌芽孢的TSB培养基，干粉胰蛋白胨17、0g.植物蛋白胨3。0g,氯化钠5、0g。磷酸氢二钾2，5g、葡萄糖2、5g,共30g溶于1L蒸馏水中。制成胰蛋白胨大豆肉汤,TSB,培养基,A.4、操作步骤A,4、1、将染菌的载体送达不锈钢管腔的正中央，制作10根测试样本,将10根测试样本均匀平行摆放在器械盒内,用双层无纺布包裹.放置在灭菌舱内 灭菌舱内如仅一层隔架,则10根样本平行摆放在器械盒内放置在灭菌舱中央，见图A，1、若灭菌舱内可摆放上下两层隔架 则将10根样本均匀摆放在两个器械盒内.分别放置在灭菌舱内上下两层隔架中央,见图A、2。按照 消毒技术规范,2002版.中的灭菌操作步骤进行半周期灭菌，灭菌结束后以无菌操作取出细菌芽孢载体、均放到TSB培养基中，56,培养48h、观察培养结果 如无细菌生长则继续培养至7d，培养结果仍无细菌生长则判断为阴性 A。4,2，将染菌的体用细丝送达聚四氟乙烯管腔的正中间。制作10根测试样本.将10根测试样本均匀平行摆放在器械盒内，用双层无纺布包裹,放置在灭菌舱内 灭菌舱内如仅一层隔架、则10根样本平行摆放在器械盒内放置在灭菌舱中央 见图A。3.若灭菌舱内可摆放上下两层隔架,则将10根样本均匀摆放在两个器械盒内。分别放置在灭菌舱内上下两层隔架中央 见图A，4 按照.消毒技术规范、2002年版,中的灭菌操作步骤进行半周期灭菌 灭菌结束后取出细菌芽孢载体.全部放到TSB培养基中 56,培养48h,观察培养结果如无细菌生长则继续培养至7d,培养结果仍无细菌生长则判定阴性，A，5。结果计算.嗜热脂肪杆菌芽孢重复以上两种材质的模拟管腔、微生物测试各重复5次,A、6.结果判定、测试结果均无细菌生长,为阴性 则判定无菌合格,