附录A，规范性附录.灭菌效果检测方法A，1.方法原理。本试验以常见的硬式镜不锈钢材料管腔,软式镜聚四氟乙烯材料管腔为模拟管腔 验证微生物的灭菌效果 本试验应采用两端开口的无缝测试管腔、如有接缝.则应保证气密性 在管腔中央放置染有细菌芽孢的载体.通过半周期灭菌循环.无菌生长、以嗜热脂肪杆菌芽孢为指标菌。同时进行微生物灭菌效果评价.所有试验均为阴性培养结果,则判定结果合格、A.2、生物指示物 嗜热脂肪杆菌芽孢.ATCC7953，A，3,验证器材A、3。1,载体，将芽孢液均匀涂布在直径为0、4mm.长度为20mm 30mm不锈钢检测材质上,以染菌后不堵塞管腔为限.嗜热脂肪杆菌芽孢阳性回收菌量应为1.106CFU,载体、5,106CFU 载体 室温下自然干燥后再使用，A、3、2,检测管腔.本试验宜采用两端开口的无缝测试管腔，如有接缝.则应保证气密性，A，3 3，不锈钢材质无接缝管腔。10根。A.3。4、聚四氟乙烯无接缝管腔,10根 A.3，5、嗜热脂肪杆菌芽孢的TSB培养基 干粉胰蛋白胨17，0g 植物蛋白胨3,0g,氯化钠5.0g,磷酸氢二钾2。5g。葡萄糖2、5g,共30g溶于1L蒸馏水中 制成胰蛋白胨大豆肉汤.TSB。培养基。A 4，操作步骤A、4、1。将染菌的载体送达不锈钢管腔的正中央 制作10根测试样本.将10根测试样本均匀平行摆放在器械盒内.用双层无纺布包裹，放置在灭菌舱内，灭菌舱内如仅一层隔架、则10根样本平行摆放在器械盒内放置在灭菌舱中央，见图A，1、若灭菌舱内可摆放上下两层隔架 则将10根样本均匀摆放在两个器械盒内、分别放置在灭菌舱内上下两层隔架中央.见图A，2。按照.消毒技术规范。2002版 中的灭菌操作步骤进行半周期灭菌,灭菌结束后以无菌操作取出细菌芽孢载体.均放到TSB培养基中 56.培养48h。观察培养结果。如无细菌生长则继续培养至7d,培养结果仍无细菌生长则判断为阴性，A。4、2，将染菌的体用细丝送达聚四氟乙烯管腔的正中间,制作10根测试样本 将10根测试样本均匀平行摆放在器械盒内、用双层无纺布包裹。放置在灭菌舱内 灭菌舱内如仅一层隔架。则10根样本平行摆放在器械盒内放置在灭菌舱中央 见图A。3 若灭菌舱内可摆放上下两层隔架.则将10根样本均匀摆放在两个器械盒内.分别放置在灭菌舱内上下两层隔架中央，见图A。4、按照，消毒技术规范。2002年版,中的灭菌操作步骤进行半周期灭菌，灭菌结束后取出细菌芽孢载体.全部放到TSB培养基中。56、培养48h 观察培养结果如无细菌生长则继续培养至7d 培养结果仍无细菌生长则判定阴性，A,5、结果计算、嗜热脂肪杆菌芽孢重复以上两种材质的模拟管腔.微生物测试各重复5次，A，6 结果判定,测试结果均无细菌生长 为阴性,则判定无菌合格，