附录A，规范性附录.灭菌效果检测方法A。1.方法原理.本试验以常见的硬式镜不锈钢材料管腔 软式镜聚四氟乙烯材料管腔为模拟管腔,验证微生物的灭菌效果，本试验应采用两端开口的无缝测试管腔。如有接缝。则应保证气密性。在管腔中央放置染有细菌芽孢的载体，通过半周期灭菌循环.无菌生长.以嗜热脂肪杆菌芽孢为指标菌.同时进行微生物灭菌效果评价,所有试验均为阴性培养结果、则判定结果合格、A、2，生物指示物、嗜热脂肪杆菌芽孢。ATCC7953 A.3.验证器材A。3.1，载体、将芽孢液均匀涂布在直径为0 4mm，长度为20mm、30mm不锈钢检测材质上.以染菌后不堵塞管腔为限,嗜热脂肪杆菌芽孢阳性回收菌量应为1，106CFU，载体 5.106CFU。载体，室温下自然干燥后再使用 A,3,2、检测管腔、本试验宜采用两端开口的无缝测试管腔，如有接缝，则应保证气密性.A,3,3,不锈钢材质无接缝管腔、10根,A.3，4。聚四氟乙烯无接缝管腔、10根.A 3，5，嗜热脂肪杆菌芽孢的TSB培养基、干粉胰蛋白胨17.0g。植物蛋白胨3 0g.氯化钠5 0g.磷酸氢二钾2,5g,葡萄糖2,5g,共30g溶于1L蒸馏水中.制成胰蛋白胨大豆肉汤。TSB.培养基.A。4,操作步骤A 4。1、将染菌的载体送达不锈钢管腔的正中央 制作10根测试样本。将10根测试样本均匀平行摆放在器械盒内、用双层无纺布包裹 放置在灭菌舱内.灭菌舱内如仅一层隔架、则10根样本平行摆放在器械盒内放置在灭菌舱中央 见图A、1。若灭菌舱内可摆放上下两层隔架.则将10根样本均匀摆放在两个器械盒内，分别放置在灭菌舱内上下两层隔架中央.见图A、2,按照。消毒技术规范，2002版、中的灭菌操作步骤进行半周期灭菌、灭菌结束后以无菌操作取出细菌芽孢载体。均放到TSB培养基中.56 培养48h.观察培养结果,如无细菌生长则继续培养至7d 培养结果仍无细菌生长则判断为阴性 A。4 2,将染菌的体用细丝送达聚四氟乙烯管腔的正中间、制作10根测试样本 将10根测试样本均匀平行摆放在器械盒内、用双层无纺布包裹、放置在灭菌舱内、灭菌舱内如仅一层隔架、则10根样本平行摆放在器械盒内放置在灭菌舱中央，见图A.3 若灭菌舱内可摆放上下两层隔架，则将10根样本均匀摆放在两个器械盒内，分别放置在灭菌舱内上下两层隔架中央、见图A,4、按照、消毒技术规范，2002年版、中的灭菌操作步骤进行半周期灭菌，灭菌结束后取出细菌芽孢载体 全部放到TSB培养基中,56。培养48h,观察培养结果如无细菌生长则继续培养至7d，培养结果仍无细菌生长则判定阴性，A、5、结果计算、嗜热脂肪杆菌芽孢重复以上两种材质的模拟管腔。微生物测试各重复5次。A 6 结果判定，测试结果均无细菌生长 为阴性、则判定无菌合格