附录A 规范性附录.灭菌效果检测方法A，1.方法原理 本试验以常见的硬式镜不锈钢材料管腔、软式镜聚四氟乙烯材料管腔为模拟管腔。验证微生物的灭菌效果、本试验应采用两端开口的无缝测试管腔,如有接缝 则应保证气密性 在管腔中央放置染有细菌芽孢的载体,通过半周期灭菌循环。无菌生长,以嗜热脂肪杆菌芽孢为指标菌,同时进行微生物灭菌效果评价、所有试验均为阴性培养结果 则判定结果合格，A,2。生物指示物,嗜热脂肪杆菌芽孢，ATCC7953。A，3 验证器材A.3，1。载体 将芽孢液均匀涂布在直径为0、4mm。长度为20mm,30mm不锈钢检测材质上 以染菌后不堵塞管腔为限.嗜热脂肪杆菌芽孢阳性回收菌量应为1，106CFU，载体.5。106CFU 载体,室温下自然干燥后再使用，A。3 2 检测管腔,本试验宜采用两端开口的无缝测试管腔.如有接缝、则应保证气密性,A。3、3.不锈钢材质无接缝管腔、10根 A 3,4.聚四氟乙烯无接缝管腔，10根,A.3。5，嗜热脂肪杆菌芽孢的TSB培养基,干粉胰蛋白胨17、0g。植物蛋白胨3.0g、氯化钠5。0g.磷酸氢二钾2.5g、葡萄糖2,5g、共30g溶于1L蒸馏水中.制成胰蛋白胨大豆肉汤,TSB、培养基、A.4，操作步骤A。4，1 将染菌的载体送达不锈钢管腔的正中央。制作10根测试样本 将10根测试样本均匀平行摆放在器械盒内。用双层无纺布包裹,放置在灭菌舱内.灭菌舱内如仅一层隔架,则10根样本平行摆放在器械盒内放置在灭菌舱中央 见图A.1 若灭菌舱内可摆放上下两层隔架 则将10根样本均匀摆放在两个器械盒内.分别放置在灭菌舱内上下两层隔架中央.见图A.2、按照，消毒技术规范，2002版.中的灭菌操作步骤进行半周期灭菌。灭菌结束后以无菌操作取出细菌芽孢载体。均放到TSB培养基中。56,培养48h，观察培养结果.如无细菌生长则继续培养至7d.培养结果仍无细菌生长则判断为阴性 A,4 2。将染菌的体用细丝送达聚四氟乙烯管腔的正中间。制作10根测试样本,将10根测试样本均匀平行摆放在器械盒内,用双层无纺布包裹、放置在灭菌舱内。灭菌舱内如仅一层隔架，则10根样本平行摆放在器械盒内放置在灭菌舱中央,见图A,3.若灭菌舱内可摆放上下两层隔架,则将10根样本均匀摆放在两个器械盒内 分别放置在灭菌舱内上下两层隔架中央、见图A。4,按照、消毒技术规范 2002年版.中的灭菌操作步骤进行半周期灭菌,灭菌结束后取出细菌芽孢载体 全部放到TSB培养基中。56。培养48h，观察培养结果如无细菌生长则继续培养至7d 培养结果仍无细菌生长则判定阴性,A,5,结果计算 嗜热脂肪杆菌芽孢重复以上两种材质的模拟管腔、微生物测试各重复5次，A.6。结果判定，测试结果均无细菌生长。为阴性、则判定无菌合格，