附录A,规范性附录.灭菌效果检测方法A 1、方法原理、本试验以常见的硬式镜不锈钢材料管腔，软式镜聚四氟乙烯材料管腔为模拟管腔 验证微生物的灭菌效果、本试验应采用两端开口的无缝测试管腔.如有接缝。则应保证气密性 在管腔中央放置染有细菌芽孢的载体、通过半周期灭菌循环。无菌生长、以嗜热脂肪杆菌芽孢为指标菌。同时进行微生物灭菌效果评价 所有试验均为阴性培养结果,则判定结果合格，A、2,生物指示物 嗜热脂肪杆菌芽孢，ATCC7953。A，3 验证器材A 3.1。载体。将芽孢液均匀涂布在直径为0。4mm。长度为20mm 30mm不锈钢检测材质上、以染菌后不堵塞管腔为限，嗜热脂肪杆菌芽孢阳性回收菌量应为1，106CFU 载体，5，106CFU。载体.室温下自然干燥后再使用.A。3。2 检测管腔 本试验宜采用两端开口的无缝测试管腔 如有接缝。则应保证气密性,A 3、3、不锈钢材质无接缝管腔，10根.A，3 4.聚四氟乙烯无接缝管腔。10根，A 3、5、嗜热脂肪杆菌芽孢的TSB培养基.干粉胰蛋白胨17.0g，植物蛋白胨3 0g 氯化钠5 0g 磷酸氢二钾2。5g。葡萄糖2，5g、共30g溶于1L蒸馏水中。制成胰蛋白胨大豆肉汤,TSB.培养基.A。4，操作步骤A，4,1、将染菌的载体送达不锈钢管腔的正中央，制作10根测试样本。将10根测试样本均匀平行摆放在器械盒内，用双层无纺布包裹，放置在灭菌舱内 灭菌舱内如仅一层隔架，则10根样本平行摆放在器械盒内放置在灭菌舱中央，见图A，1 若灭菌舱内可摆放上下两层隔架.则将10根样本均匀摆放在两个器械盒内 分别放置在灭菌舱内上下两层隔架中央.见图A，2、按照 消毒技术规范、2002版、中的灭菌操作步骤进行半周期灭菌 灭菌结束后以无菌操作取出细菌芽孢载体 均放到TSB培养基中,56，培养48h、观察培养结果、如无细菌生长则继续培养至7d，培养结果仍无细菌生长则判断为阴性,A,4，2、将染菌的体用细丝送达聚四氟乙烯管腔的正中间，制作10根测试样本。将10根测试样本均匀平行摆放在器械盒内 用双层无纺布包裹 放置在灭菌舱内 灭菌舱内如仅一层隔架,则10根样本平行摆放在器械盒内放置在灭菌舱中央，见图A。3,若灭菌舱内可摆放上下两层隔架,则将10根样本均匀摆放在两个器械盒内 分别放置在灭菌舱内上下两层隔架中央.见图A，4，按照，消毒技术规范.2002年版，中的灭菌操作步骤进行半周期灭菌,灭菌结束后取出细菌芽孢载体、全部放到TSB培养基中，56.培养48h、观察培养结果如无细菌生长则继续培养至7d.培养结果仍无细菌生长则判定阴性，A，5,结果计算。嗜热脂肪杆菌芽孢重复以上两种材质的模拟管腔.微生物测试各重复5次.A,6。结果判定 测试结果均无细菌生长,为阴性.则判定无菌合格