附录A.规范性附录。灭菌效果检测方法A.1。方法原理,本试验以常见的硬式镜不锈钢材料管腔、软式镜聚四氟乙烯材料管腔为模拟管腔.验证微生物的灭菌效果、本试验应采用两端开口的无缝测试管腔,如有接缝、则应保证气密性 在管腔中央放置染有细菌芽孢的载体,通过半周期灭菌循环,无菌生长,以嗜热脂肪杆菌芽孢为指标菌。同时进行微生物灭菌效果评价、所有试验均为阴性培养结果。则判定结果合格.A。2。生物指示物，嗜热脂肪杆菌芽孢、ATCC7953。A。3 验证器材A 3、1,载体,将芽孢液均匀涂布在直径为0,4mm,长度为20mm。30mm不锈钢检测材质上。以染菌后不堵塞管腔为限,嗜热脂肪杆菌芽孢阳性回收菌量应为1,106CFU,载体、5、106CFU.载体。室温下自然干燥后再使用，A 3,2，检测管腔。本试验宜采用两端开口的无缝测试管腔 如有接缝.则应保证气密性，A、3、3 不锈钢材质无接缝管腔、10根。A.3,4、聚四氟乙烯无接缝管腔 10根。A，3,5 嗜热脂肪杆菌芽孢的TSB培养基，干粉胰蛋白胨17.0g 植物蛋白胨3、0g.氯化钠5、0g 磷酸氢二钾2,5g,葡萄糖2,5g，共30g溶于1L蒸馏水中 制成胰蛋白胨大豆肉汤 TSB 培养基，A.4 操作步骤A,4,1。将染菌的载体送达不锈钢管腔的正中央，制作10根测试样本，将10根测试样本均匀平行摆放在器械盒内，用双层无纺布包裹。放置在灭菌舱内。灭菌舱内如仅一层隔架,则10根样本平行摆放在器械盒内放置在灭菌舱中央、见图A,1。若灭菌舱内可摆放上下两层隔架,则将10根样本均匀摆放在两个器械盒内.分别放置在灭菌舱内上下两层隔架中央，见图A.2，按照 消毒技术规范，2002版,中的灭菌操作步骤进行半周期灭菌、灭菌结束后以无菌操作取出细菌芽孢载体.均放到TSB培养基中,56、培养48h。观察培养结果.如无细菌生长则继续培养至7d.培养结果仍无细菌生长则判断为阴性，A 4。2.将染菌的体用细丝送达聚四氟乙烯管腔的正中间.制作10根测试样本。将10根测试样本均匀平行摆放在器械盒内,用双层无纺布包裹。放置在灭菌舱内。灭菌舱内如仅一层隔架 则10根样本平行摆放在器械盒内放置在灭菌舱中央.见图A 3。若灭菌舱内可摆放上下两层隔架、则将10根样本均匀摆放在两个器械盒内.分别放置在灭菌舱内上下两层隔架中央.见图A,4、按照、消毒技术规范,2002年版，中的灭菌操作步骤进行半周期灭菌,灭菌结束后取出细菌芽孢载体，全部放到TSB培养基中.56,培养48h,观察培养结果如无细菌生长则继续培养至7d，培养结果仍无细菌生长则判定阴性。A，5 结果计算.嗜热脂肪杆菌芽孢重复以上两种材质的模拟管腔,微生物测试各重复5次 A、6 结果判定。测试结果均无细菌生长、为阴性。则判定无菌合格.