附录A，规范性附录.灭菌效果检测方法A.1，方法原理，本试验以常见的硬式镜不锈钢材料管腔，软式镜聚四氟乙烯材料管腔为模拟管腔，验证微生物的灭菌效果、本试验应采用两端开口的无缝测试管腔.如有接缝、则应保证气密性，在管腔中央放置染有细菌芽孢的载体 通过半周期灭菌循环。无菌生长,以嗜热脂肪杆菌芽孢为指标菌.同时进行微生物灭菌效果评价,所有试验均为阴性培养结果,则判定结果合格。A。2。生物指示物 嗜热脂肪杆菌芽孢 ATCC7953.A.3，验证器材A，3.1 载体。将芽孢液均匀涂布在直径为0.4mm,长度为20mm,30mm不锈钢检测材质上，以染菌后不堵塞管腔为限,嗜热脂肪杆菌芽孢阳性回收菌量应为1,106CFU 载体.5 106CFU。载体 室温下自然干燥后再使用、A，3，2、检测管腔。本试验宜采用两端开口的无缝测试管腔 如有接缝,则应保证气密性,A，3、3.不锈钢材质无接缝管腔,10根.A。3 4.聚四氟乙烯无接缝管腔 10根,A,3,5、嗜热脂肪杆菌芽孢的TSB培养基，干粉胰蛋白胨17.0g 植物蛋白胨3.0g，氯化钠5，0g。磷酸氢二钾2 5g.葡萄糖2，5g,共30g溶于1L蒸馏水中 制成胰蛋白胨大豆肉汤，TSB.培养基.A，4 操作步骤A，4，1，将染菌的载体送达不锈钢管腔的正中央.制作10根测试样本.将10根测试样本均匀平行摆放在器械盒内.用双层无纺布包裹,放置在灭菌舱内 灭菌舱内如仅一层隔架，则10根样本平行摆放在器械盒内放置在灭菌舱中央。见图A。1，若灭菌舱内可摆放上下两层隔架 则将10根样本均匀摆放在两个器械盒内.分别放置在灭菌舱内上下两层隔架中央 见图A。2。按照，消毒技术规范、2002版，中的灭菌操作步骤进行半周期灭菌,灭菌结束后以无菌操作取出细菌芽孢载体、均放到TSB培养基中，56、培养48h,观察培养结果 如无细菌生长则继续培养至7d。培养结果仍无细菌生长则判断为阴性，A。4。2.将染菌的体用细丝送达聚四氟乙烯管腔的正中间，制作10根测试样本,将10根测试样本均匀平行摆放在器械盒内,用双层无纺布包裹、放置在灭菌舱内、灭菌舱内如仅一层隔架、则10根样本平行摆放在器械盒内放置在灭菌舱中央。见图A、3,若灭菌舱内可摆放上下两层隔架 则将10根样本均匀摆放在两个器械盒内.分别放置在灭菌舱内上下两层隔架中央 见图A。4 按照，消毒技术规范.2002年版、中的灭菌操作步骤进行半周期灭菌。灭菌结束后取出细菌芽孢载体、全部放到TSB培养基中。56。培养48h、观察培养结果如无细菌生长则继续培养至7d,培养结果仍无细菌生长则判定阴性、A.5 结果计算.嗜热脂肪杆菌芽孢重复以上两种材质的模拟管腔，微生物测试各重复5次、A。6.结果判定、测试结果均无细菌生长,为阴性.则判定无菌合格