附录A、规范性附录，灭菌效果检测方法A。1 方法原理 本试验以常见的硬式镜不锈钢材料管腔。软式镜聚四氟乙烯材料管腔为模拟管腔，验证微生物的灭菌效果.本试验应采用两端开口的无缝测试管腔.如有接缝,则应保证气密性，在管腔中央放置染有细菌芽孢的载体.通过半周期灭菌循环，无菌生长.以嗜热脂肪杆菌芽孢为指标菌 同时进行微生物灭菌效果评价，所有试验均为阴性培养结果，则判定结果合格,A 2 生物指示物，嗜热脂肪杆菌芽孢，ATCC7953、A 3、验证器材A、3。1,载体,将芽孢液均匀涂布在直径为0，4mm.长度为20mm 30mm不锈钢检测材质上.以染菌后不堵塞管腔为限 嗜热脂肪杆菌芽孢阳性回收菌量应为1 106CFU、载体,5,106CFU。载体,室温下自然干燥后再使用.A,3，2，检测管腔,本试验宜采用两端开口的无缝测试管腔 如有接缝，则应保证气密性。A 3、3,不锈钢材质无接缝管腔、10根 A，3、4，聚四氟乙烯无接缝管腔、10根，A,3。5,嗜热脂肪杆菌芽孢的TSB培养基，干粉胰蛋白胨17.0g,植物蛋白胨3.0g，氯化钠5,0g.磷酸氢二钾2.5g,葡萄糖2。5g，共30g溶于1L蒸馏水中 制成胰蛋白胨大豆肉汤 TSB。培养基，A 4。操作步骤A、4 1。将染菌的载体送达不锈钢管腔的正中央 制作10根测试样本,将10根测试样本均匀平行摆放在器械盒内。用双层无纺布包裹，放置在灭菌舱内、灭菌舱内如仅一层隔架,则10根样本平行摆放在器械盒内放置在灭菌舱中央,见图A,1.若灭菌舱内可摆放上下两层隔架,则将10根样本均匀摆放在两个器械盒内、分别放置在灭菌舱内上下两层隔架中央 见图A 2 按照,消毒技术规范.2002版。中的灭菌操作步骤进行半周期灭菌 灭菌结束后以无菌操作取出细菌芽孢载体.均放到TSB培养基中 56 培养48h、观察培养结果、如无细菌生长则继续培养至7d.培养结果仍无细菌生长则判断为阴性、A 4 2,将染菌的体用细丝送达聚四氟乙烯管腔的正中间。制作10根测试样本，将10根测试样本均匀平行摆放在器械盒内，用双层无纺布包裹.放置在灭菌舱内。灭菌舱内如仅一层隔架,则10根样本平行摆放在器械盒内放置在灭菌舱中央,见图A，3。若灭菌舱内可摆放上下两层隔架、则将10根样本均匀摆放在两个器械盒内、分别放置在灭菌舱内上下两层隔架中央。见图A 4，按照 消毒技术规范,2002年版.中的灭菌操作步骤进行半周期灭菌，灭菌结束后取出细菌芽孢载体 全部放到TSB培养基中 56。培养48h、观察培养结果如无细菌生长则继续培养至7d、培养结果仍无细菌生长则判定阴性。A。5,结果计算。嗜热脂肪杆菌芽孢重复以上两种材质的模拟管腔。微生物测试各重复5次。A、6、结果判定 测试结果均无细菌生长。为阴性,则判定无菌合格