附录A,规范性附录、细菌定量杀灭试验A。1 试验原理 将规定浓度的细菌悬液以一定比例与酸性电解水混合。作用至规定的时间后加入中和剂。终止酸性电解水的杀菌活性、进行活菌计数、然后与阳性对照组细菌悬液中的菌落数进行比较,以确定其杀菌效果.A，2.悬液定量杀菌试验A、2 1,菌悬液的制备A、2.1、1，按,消毒技术规范,2002年版、要求将细菌繁殖体和枯草杆菌黑色变种芽孢制成2、109CFU。mL、9，109CFU，mL的试验用菌悬液。A、2。1。2。按，消毒技术规范、2002年版 要求将白色念珠菌制成2 108CFU mL。9，108CFU,mL的试验用菌悬液，A、2，2。悬液定量杀菌试验操作程序A.2。2,1.开启生成器。待产生的酸性电解水中有效成分处于稳定状态时。用250mL磨口锥形瓶接取满瓶后。盖好瓶盖.置20。1.水浴备用 A 2.2、2。取消毒试验用无菌大试管 先加入0 05mL试验用菌液.再加入0,05mL有机干扰物质 混匀。置20。1,水浴中5min后,用无菌吸管吸取酸性电解水9 9mL注入其中。迅速混匀并立即计时、A，2，2，3.待试验菌与消毒剂相互作用至各预定时间。分别吸取0，5mL试验菌与酸性电解水的混合液加于含4，5mL中和剂、0，1。硫代硫酸钠 0,1，吐温80的生理盐水,的试管中、混匀 作用10min后、分别吸取1、0mL样液 按活菌培养计数方法测定存活菌数，每管样液接种2个平皿。如平板上生长的菌落数较多时 可进行系列10倍稀释后.再进行活菌培养计数,A 2、2.4 同时用标准硬水代替酸性电解水。进行平行试验,作为阳性对照,A.2 2.5、所有试验样本均在37。温箱中培养 对细菌繁殖体培养48h观察最终结果,对细菌芽孢和白色念珠菌需培养72h观察最终结果.A.2,2,6、试验重复3次.包括对照,计算各组的活菌浓度.CFU、mL 并换算为对数值.N，然后按式，A。1 计算杀灭对数值 A.2，3、杀灭对数值的计算。计算各组的活菌浓度、CFU.mL 并换算为对数值.N，然后按式。A。1。计算杀灭对数值,KL N0。Nx.A 1、式中,KL。杀灭对数值，N0,对照组平均活菌浓度的对数值。Nx 试验组活菌浓度对数值,计算杀灭对数值时，取小数点后两位值,可以进行数字修约.但是，如果消毒试验组消毒处理后平均生长菌落数小于1CFU、杀灭对数值即大于或等于对照组平均活菌浓度的对数值、KL、lg.N0,A 2，4，评价规定、取酸性电解水原液与3个作用时间。重复试验3次,在最短作用时间、以及最短作用时间的1，5倍时.对大肠杆菌，金黄色葡萄球菌，铜绿假单胞菌、枯草杆菌黑色变种芽孢，各次试验的杀灭对数值均、5.00,对白色念珠菌，各次试验的杀灭对数值均.4。00.判定为消毒合格，A，2。5 注意事项A。2，5.1。试验中所使用的中和剂,稀释液和培养基等.各批次均应进行无菌检查.发现有菌生长，则全部试验需换用未污染试剂或培养基重做.A 2 5 2,进行细菌液定量杀菌试验时。对用于清洗物品的消毒或用于冲洗浸泡消毒，有机干扰物质采用0,3，3g L.牛血清白蛋白、对未清洗的物品或有机物较多的物品的消毒.有机干扰物采用3。30g L。牛血清白蛋白,