附录A。规范性附录、细菌定量杀灭试验A.1、试验原理、将规定浓度的细菌悬液以一定比例与酸性电解水混合、作用至规定的时间后加入中和剂 终止酸性电解水的杀菌活性。进行活菌计数.然后与阳性对照组细菌悬液中的菌落数进行比较。以确定其杀菌效果，A 2.悬液定量杀菌试验A,2 1、菌悬液的制备A。2、1，1。按,消毒技术规范、2002年版,要求将细菌繁殖体和枯草杆菌黑色变种芽孢制成2,109CFU.mL.9，109CFU、mL的试验用菌悬液、A,2。1,2，按，消毒技术规范、2002年版.要求将白色念珠菌制成2.108CFU mL,9.108CFU.mL的试验用菌悬液,A.2 2.悬液定量杀菌试验操作程序A.2 2.1,开启生成器,待产生的酸性电解水中有效成分处于稳定状态时、用250mL磨口锥形瓶接取满瓶后,盖好瓶盖，置20 1，水浴备用.A、2，2,2。取消毒试验用无菌大试管，先加入0。05mL试验用菌液，再加入0，05mL有机干扰物质 混匀。置20.1,水浴中5min后，用无菌吸管吸取酸性电解水9。9mL注入其中,迅速混匀并立即计时，A、2 2.3 待试验菌与消毒剂相互作用至各预定时间。分别吸取0,5mL试验菌与酸性电解水的混合液加于含4.5mL中和剂,0、1、硫代硫酸钠.0、1。吐温80的生理盐水。的试管中.混匀，作用10min后,分别吸取1,0mL样液 按活菌培养计数方法测定存活菌数,每管样液接种2个平皿 如平板上生长的菌落数较多时、可进行系列10倍稀释后。再进行活菌培养计数，A.2,2,4。同时用标准硬水代替酸性电解水,进行平行试验、作为阳性对照。A、2 2，5。所有试验样本均在37.温箱中培养。对细菌繁殖体培养48h观察最终结果，对细菌芽孢和白色念珠菌需培养72h观察最终结果，A.2 2,6，试验重复3次.包括对照.计算各组的活菌浓度、CFU,mL、并换算为对数值、N,然后按式,A。1，计算杀灭对数值 A，2 3、杀灭对数值的计算。计算各组的活菌浓度，CFU,mL,并换算为对数值。N 然后按式,A.1、计算杀灭对数值、KL N0 Nx,A。1、式中、KL。杀灭对数值。N0、对照组平均活菌浓度的对数值。Nx.试验组活菌浓度对数值 计算杀灭对数值时 取小数点后两位值 可以进行数字修约。但是，如果消毒试验组消毒处理后平均生长菌落数小于1CFU 杀灭对数值即大于或等于对照组平均活菌浓度的对数值、KL lg，N0,A 2。4、评价规定,取酸性电解水原液与3个作用时间,重复试验3次。在最短作用时间.以及最短作用时间的1.5倍时,对大肠杆菌，金黄色葡萄球菌 铜绿假单胞菌、枯草杆菌黑色变种芽孢,各次试验的杀灭对数值均。5 00、对白色念珠菌、各次试验的杀灭对数值均，4.00,判定为消毒合格、A、2.5,注意事项A，2，5。1、试验中所使用的中和剂、稀释液和培养基等,各批次均应进行无菌检查。发现有菌生长.则全部试验需换用未污染试剂或培养基重做，A、2 5.2。进行细菌液定量杀菌试验时,对用于清洗物品的消毒或用于冲洗浸泡消毒、有机干扰物质采用0，3、3g.L.牛血清白蛋白、对未清洗的物品或有机物较多的物品的消毒.有机干扰物采用3,30g L.牛血清白蛋白，