附录A.规范性附录.细菌定量杀灭试验A 1.试验原理.将规定浓度的细菌悬液以一定比例与酸性电解水混合.作用至规定的时间后加入中和剂、终止酸性电解水的杀菌活性、进行活菌计数，然后与阳性对照组细菌悬液中的菌落数进行比较。以确定其杀菌效果、A、2,悬液定量杀菌试验A。2,1。菌悬液的制备A 2.1.1 按。消毒技术规范、2002年版.要求将细菌繁殖体和枯草杆菌黑色变种芽孢制成2、109CFU mL,9,109CFU.mL的试验用菌悬液，A 2.1，2、按,消毒技术规范。2002年版.要求将白色念珠菌制成2、108CFU、mL.9.108CFU.mL的试验用菌悬液,A,2、2.悬液定量杀菌试验操作程序A。2.2，1，开启生成器,待产生的酸性电解水中有效成分处于稳定状态时,用250mL磨口锥形瓶接取满瓶后，盖好瓶盖,置20 1，水浴备用、A,2,2.2.取消毒试验用无菌大试管，先加入0。05mL试验用菌液。再加入0，05mL有机干扰物质、混匀。置20,1,水浴中5min后 用无菌吸管吸取酸性电解水9，9mL注入其中.迅速混匀并立即计时,A 2 2，3。待试验菌与消毒剂相互作用至各预定时间.分别吸取0、5mL试验菌与酸性电解水的混合液加于含4。5mL中和剂.0.1、硫代硫酸钠。0。1 吐温80的生理盐水。的试管中，混匀 作用10min后.分别吸取1.0mL样液，按活菌培养计数方法测定存活菌数.每管样液接种2个平皿。如平板上生长的菌落数较多时,可进行系列10倍稀释后。再进行活菌培养计数。A、2、2,4。同时用标准硬水代替酸性电解水。进行平行试验.作为阳性对照.A 2.2 5，所有试验样本均在37。温箱中培养，对细菌繁殖体培养48h观察最终结果。对细菌芽孢和白色念珠菌需培养72h观察最终结果,A，2 2 6 试验重复3次、包括对照,计算各组的活菌浓度 CFU，mL，并换算为对数值 N。然后按式，A。1 计算杀灭对数值,A 2、3、杀灭对数值的计算,计算各组的活菌浓度，CFU mL、并换算为对数值 N，然后按式,A。1。计算杀灭对数值、KL N0、Nx。A，1。式中，KL,杀灭对数值.N0。对照组平均活菌浓度的对数值,Nx，试验组活菌浓度对数值。计算杀灭对数值时、取小数点后两位值。可以进行数字修约.但是，如果消毒试验组消毒处理后平均生长菌落数小于1CFU,杀灭对数值即大于或等于对照组平均活菌浓度的对数值,KL。lg,N0.A,2.4.评价规定。取酸性电解水原液与3个作用时间、重复试验3次。在最短作用时间、以及最短作用时间的1 5倍时，对大肠杆菌 金黄色葡萄球菌.铜绿假单胞菌 枯草杆菌黑色变种芽孢。各次试验的杀灭对数值均.5.00、对白色念珠菌、各次试验的杀灭对数值均。4 00、判定为消毒合格，A.2.5。注意事项A 2、5.1,试验中所使用的中和剂.稀释液和培养基等，各批次均应进行无菌检查,发现有菌生长,则全部试验需换用未污染试剂或培养基重做,A。2 5,2.进行细菌液定量杀菌试验时。对用于清洗物品的消毒或用于冲洗浸泡消毒，有机干扰物质采用0。3，3g.L、牛血清白蛋白。对未清洗的物品或有机物较多的物品的消毒 有机干扰物采用3，30g，L、牛血清白蛋白,