附录A,规范性附录,细菌定量杀灭试验A。1 试验原理.将规定浓度的细菌悬液以一定比例与酸性电解水混合，作用至规定的时间后加入中和剂，终止酸性电解水的杀菌活性,进行活菌计数。然后与阳性对照组细菌悬液中的菌落数进行比较,以确定其杀菌效果 A，2,悬液定量杀菌试验A,2.1.菌悬液的制备A。2。1、1、按。消毒技术规范、2002年版.要求将细菌繁殖体和枯草杆菌黑色变种芽孢制成2、109CFU mL 9,109CFU,mL的试验用菌悬液、A 2.1.2、按、消毒技术规范 2002年版。要求将白色念珠菌制成2,108CFU，mL。9，108CFU,mL的试验用菌悬液,A.2,2。悬液定量杀菌试验操作程序A 2，2、1.开启生成器，待产生的酸性电解水中有效成分处于稳定状态时，用250mL磨口锥形瓶接取满瓶后,盖好瓶盖,置20.1。水浴备用，A.2.2 2、取消毒试验用无菌大试管，先加入0。05mL试验用菌液。再加入0，05mL有机干扰物质，混匀，置20、1。水浴中5min后。用无菌吸管吸取酸性电解水9。9mL注入其中.迅速混匀并立即计时 A 2。2、3。待试验菌与消毒剂相互作用至各预定时间,分别吸取0，5mL试验菌与酸性电解水的混合液加于含4，5mL中和剂,0，1。硫代硫酸钠.0。1.吐温80的生理盐水，的试管中，混匀。作用10min后.分别吸取1，0mL样液、按活菌培养计数方法测定存活菌数，每管样液接种2个平皿，如平板上生长的菌落数较多时.可进行系列10倍稀释后 再进行活菌培养计数、A、2。2.4 同时用标准硬水代替酸性电解水,进行平行试验。作为阳性对照.A。2 2，5。所有试验样本均在37、温箱中培养、对细菌繁殖体培养48h观察最终结果 对细菌芽孢和白色念珠菌需培养72h观察最终结果，A。2,2 6。试验重复3次。包括对照、计算各组的活菌浓度,CFU mL 并换算为对数值 N.然后按式、A 1.计算杀灭对数值,A.2，3，杀灭对数值的计算,计算各组的活菌浓度，CFU、mL、并换算为对数值.N 然后按式。A、1。计算杀灭对数值，KL,N0。Nx.A，1.式中 KL，杀灭对数值，N0，对照组平均活菌浓度的对数值。Nx.试验组活菌浓度对数值 计算杀灭对数值时、取小数点后两位值，可以进行数字修约.但是 如果消毒试验组消毒处理后平均生长菌落数小于1CFU.杀灭对数值即大于或等于对照组平均活菌浓度的对数值.KL.lg.N0、A 2、4，评价规定、取酸性电解水原液与3个作用时间.重复试验3次、在最短作用时间.以及最短作用时间的1.5倍时,对大肠杆菌,金黄色葡萄球菌.铜绿假单胞菌.枯草杆菌黑色变种芽孢.各次试验的杀灭对数值均、5、00。对白色念珠菌,各次试验的杀灭对数值均,4 00。判定为消毒合格、A,2。5、注意事项A,2、5。1,试验中所使用的中和剂.稀释液和培养基等。各批次均应进行无菌检查.发现有菌生长,则全部试验需换用未污染试剂或培养基重做、A.2。5.2。进行细菌液定量杀菌试验时.对用于清洗物品的消毒或用于冲洗浸泡消毒,有机干扰物质采用0。3 3g、L，牛血清白蛋白。对未清洗的物品或有机物较多的物品的消毒,有机干扰物采用3，30g。L、牛血清白蛋白