附录A。规范性附录.细菌定量杀灭试验A,1.试验原理 将规定浓度的细菌悬液以一定比例与酸性电解水混合。作用至规定的时间后加入中和剂.终止酸性电解水的杀菌活性、进行活菌计数,然后与阳性对照组细菌悬液中的菌落数进行比较、以确定其杀菌效果 A,2。悬液定量杀菌试验A 2 1。菌悬液的制备A，2、1 1。按，消毒技术规范、2002年版、要求将细菌繁殖体和枯草杆菌黑色变种芽孢制成2。109CFU，mL、9.109CFU、mL的试验用菌悬液,A 2，1、2.按、消毒技术规范,2002年版。要求将白色念珠菌制成2。108CFU mL 9。108CFU.mL的试验用菌悬液、A、2 2 悬液定量杀菌试验操作程序A，2 2.1、开启生成器。待产生的酸性电解水中有效成分处于稳定状态时，用250mL磨口锥形瓶接取满瓶后、盖好瓶盖 置20,1 水浴备用，A 2 2,2。取消毒试验用无菌大试管、先加入0、05mL试验用菌液、再加入0,05mL有机干扰物质。混匀。置20.1.水浴中5min后、用无菌吸管吸取酸性电解水9、9mL注入其中 迅速混匀并立即计时，A 2.2、3、待试验菌与消毒剂相互作用至各预定时间 分别吸取0、5mL试验菌与酸性电解水的混合液加于含4，5mL中和剂,0 1,硫代硫酸钠 0、1.吐温80的生理盐水、的试管中、混匀，作用10min后、分别吸取1.0mL样液，按活菌培养计数方法测定存活菌数，每管样液接种2个平皿、如平板上生长的菌落数较多时、可进行系列10倍稀释后.再进行活菌培养计数、A 2、2.4.同时用标准硬水代替酸性电解水、进行平行试验。作为阳性对照、A,2，2 5、所有试验样本均在37，温箱中培养，对细菌繁殖体培养48h观察最终结果,对细菌芽孢和白色念珠菌需培养72h观察最终结果.A,2，2,6。试验重复3次.包括对照 计算各组的活菌浓度,CFU，mL.并换算为对数值.N。然后按式、A。1，计算杀灭对数值.A、2。3 杀灭对数值的计算 计算各组的活菌浓度、CFU。mL。并换算为对数值、N，然后按式.A，1、计算杀灭对数值，KL、N0 Nx。A 1.式中,KL。杀灭对数值 N0、对照组平均活菌浓度的对数值，Nx,试验组活菌浓度对数值 计算杀灭对数值时 取小数点后两位值。可以进行数字修约 但是 如果消毒试验组消毒处理后平均生长菌落数小于1CFU，杀灭对数值即大于或等于对照组平均活菌浓度的对数值.KL.lg、N0、A,2.4，评价规定.取酸性电解水原液与3个作用时间，重复试验3次，在最短作用时间 以及最短作用时间的1.5倍时、对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌。铜绿假单胞菌,枯草杆菌黑色变种芽孢、各次试验的杀灭对数值均.5、00。对白色念珠菌，各次试验的杀灭对数值均,4。00,判定为消毒合格、A 2、5 注意事项A 2 5 1。试验中所使用的中和剂 稀释液和培养基等 各批次均应进行无菌检查,发现有菌生长、则全部试验需换用未污染试剂或培养基重做 A.2.5，2 进行细菌液定量杀菌试验时。对用于清洗物品的消毒或用于冲洗浸泡消毒。有机干扰物质采用0.3。3g。L,牛血清白蛋白、对未清洗的物品或有机物较多的物品的消毒、有机干扰物采用3、30g,L.牛血清白蛋白。