附录A。规范性附录 细菌定量杀灭试验A.1,试验原理 将规定浓度的细菌悬液以一定比例与酸性电解水混合 作用至规定的时间后加入中和剂，终止酸性电解水的杀菌活性，进行活菌计数 然后与阳性对照组细菌悬液中的菌落数进行比较，以确定其杀菌效果、A，2 悬液定量杀菌试验A 2.1。菌悬液的制备A 2。1 1、按,消毒技术规范.2002年版,要求将细菌繁殖体和枯草杆菌黑色变种芽孢制成2.109CFU、mL 9，109CFU、mL的试验用菌悬液。A 2 1。2,按 消毒技术规范,2002年版 要求将白色念珠菌制成2.108CFU，mL.9，108CFU.mL的试验用菌悬液，A。2。2 悬液定量杀菌试验操作程序A,2、2.1，开启生成器 待产生的酸性电解水中有效成分处于稳定状态时,用250mL磨口锥形瓶接取满瓶后，盖好瓶盖，置20，1,水浴备用、A、2,2，2,取消毒试验用无菌大试管，先加入0.05mL试验用菌液,再加入0 05mL有机干扰物质，混匀，置20。1 水浴中5min后、用无菌吸管吸取酸性电解水9.9mL注入其中.迅速混匀并立即计时.A.2.2,3、待试验菌与消毒剂相互作用至各预定时间。分别吸取0 5mL试验菌与酸性电解水的混合液加于含4.5mL中和剂.0。1 硫代硫酸钠，0，1 吐温80的生理盐水.的试管中 混匀、作用10min后 分别吸取1，0mL样液。按活菌培养计数方法测定存活菌数.每管样液接种2个平皿 如平板上生长的菌落数较多时.可进行系列10倍稀释后 再进行活菌培养计数,A。2。2 4，同时用标准硬水代替酸性电解水 进行平行试验、作为阳性对照、A、2。2.5、所有试验样本均在37 温箱中培养。对细菌繁殖体培养48h观察最终结果，对细菌芽孢和白色念珠菌需培养72h观察最终结果，A 2，2、6、试验重复3次.包括对照。计算各组的活菌浓度、CFU,mL、并换算为对数值.N，然后按式,A，1，计算杀灭对数值,A.2 3.杀灭对数值的计算,计算各组的活菌浓度，CFU,mL 并换算为对数值,N.然后按式，A。1.计算杀灭对数值。KL，N0、Nx,A，1，式中 KL。杀灭对数值,N0。对照组平均活菌浓度的对数值、Nx。试验组活菌浓度对数值 计算杀灭对数值时.取小数点后两位值,可以进行数字修约,但是 如果消毒试验组消毒处理后平均生长菌落数小于1CFU，杀灭对数值即大于或等于对照组平均活菌浓度的对数值、KL，lg，N0,A 2、4。评价规定。取酸性电解水原液与3个作用时间 重复试验3次，在最短作用时间 以及最短作用时间的1。5倍时,对大肠杆菌，金黄色葡萄球菌，铜绿假单胞菌.枯草杆菌黑色变种芽孢.各次试验的杀灭对数值均、5,00，对白色念珠菌,各次试验的杀灭对数值均.4，00,判定为消毒合格 A，2。5，注意事项A。2 5 1 试验中所使用的中和剂。稀释液和培养基等。各批次均应进行无菌检查、发现有菌生长、则全部试验需换用未污染试剂或培养基重做。A,2，5,2 进行细菌液定量杀菌试验时。对用于清洗物品的消毒或用于冲洗浸泡消毒.有机干扰物质采用0.3，3g、L,牛血清白蛋白，对未清洗的物品或有机物较多的物品的消毒 有机干扰物采用3。30g L，牛血清白蛋白,